用复性电泳技术研究溶酶体蛋白水解酶的性质和活性

介绍了复性单向电泳（Ｇ－ＰＡＧＥ）和复性双向电泳（ＩＥＦ－Ｇ－ＰＡＧＥ）的概念、原理、方法、应用范围、优缺点和使用该方法应注意的事项。并用该方法定性和定量分析了Ｃ６大白鼠神经胶质瘤细胞酸性溶酶体蛋白水解酶的性质和活性。     

重组人粒细胞集落刺激因子的纯化与复性

人粒细胞集落刺激因子 ( h G-CSF)有促进粒系造血干细胞增殖分化及增强成熟细胞功能的作用 ,广泛应用于医疗上癌症化疗、骨髓发育不良、再生障碍性贫血和先天性、特发性等嗜中性白细胞缺乏症的治疗。目前 ,h G-CSF主要来源工程菌发酵产生 ,浓缩于菌体包涵体之中 ,包涵体之中的 h G-CSF是没有生物活性的 ,必须经过溶解、分离、纯化和复性才有活性 ,有关 h G-CSF纯化和复性的研究实验如下 :一、材料与方法1 .包涵体来源 :上海三维公司赠送 ,由工程菌经发酵、收集菌体、破菌、离心和沉淀获得。2 .包涵体的洗涤 :主要是洗去包涵体表面的…     

缺失Cys45—Cys50二硫键的三种突变体凝乳酶原复性的比较研究

通过对（Ｃｙｓ－Ａｓｐ）４５／（Ｃｙｓ－Ｓｅｒ）５０，（Ｃｙｓ－Ａｓｐ）４５和（Ｃｙｓ－Ｓｅｒ）５０３种突变体凝乳酶原复性的比较研究，发现：１．３种突变体凝乳酶原多肽链复性的条件基本一致。（２）ＰＤＩ能有效地促进３种突变体凝乳酶原的复性；３．３种突变体凝乳酶原的活化条件一致；４．单突变体凝乳酶原多肽链正确折叠的效率低于双突变体。基于上述结果，我们认为，Ｃｙｘ４５－Ｃｙｓ５０二硫键的形成有利于凝乳酶     

利用温敏性凝胶的缓释作用促进变性溶菌酶复性

为了开发温敏凝胶在蛋白质复性方面的方法，利用N-异丙基丙烯酰胺温敏凝胶具有的缓释作用，对变性蛋白质进行了复性．考察不同合成条件下凝胶的性能，结果表明，在制胶温度为22℃、凝胶单体浓度为10％、交联度为5％制得的凝胶，具有较好的机械强度、较大的溶胀倍率、缩水倍率及良好的温敏性能．凝胶的缓释作用对变性还原溶茵酶辅助复性的影响表明，在复性酶终浓度为0．5mg／mL时，凝胶辅助蛋白质的复性收率可达68％，比直接稀释复性（收率为57％）高19％．特别是对高浓度蛋白质的复性（1．5mg／mL），凝胶辅助复性也获得了很好的效果，复性收率高出直接稀释复性37％，表现出温敏凝胶在实际蛋白质复性中的应用前景．     

大肠杆菌中重组猪生长激素提取方法及变复性的比较研究

通过对基因工程菌pgh／E．coli BL21用酶溶解、超声波处理、超声波处理与液氮冻融相结合三种方法进行破菌，用盐酸胍法进行变复性，提取重组猪生长激素(rpGH)．结果表明用超声波处理与液氮冻融相结合的方法裂解细菌，盐酸胍法变复性，rpGH的提取率最高，达72．16％；而用尿素法对rpGH在大肠杆菌内所形成的包涵体变复性，rpGH的提取率仅为49．82％．     

血管抑素3A工程蛋白的柱复性与离子交换纯化

由大肠杆菌以包涵体形式表达的一种抗内皮细胞生长工程蛋白(A nti-ang iogen ic agent,简称3A)经变性,Sephacry l S-100 HR柱复性,SP Sepharose FF离子交换吸附纯化,SephadexG-25脱盐,获得复性率为53.47%,HPLC纯度为92.52%的3A活性蛋白。以猪髋动脉内皮细胞为受检细胞,表明纯化蛋白具有抑制内皮细胞生长的特性。     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达、复性及分离纯化

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ—ＰＡ）。ＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中，在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％．以醋酸钟显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ—ＰＡ表达条带，进行复性处理．Ｒ性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ—ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ—ＰＡ．     

论苏氏文艺思想的哲理依据

苏氏“寂感”说分为体用、动静、性情三个层面，强调主体修为由思而至于无思、“入神”以致用；物我交相感应以至于“忘”；性发为情而最终复于性。苏氏“寂感”说是苏轼等人文学思想的哲学基础。一方面影响其文艺思维方式，体现为对创作主体自身修养的重视，要求尽物之妙、随物赋形，达到“入神”境界；一方面影响其艺术风格，追求由绚烂之极回归平淡。     

高效疏水色谱法对蛋白质复性和纯化的研究进展

本文综合评述了疏水相互作用色谱法的理论及其在在蛋白质分离纯化和复性方面的研究进展.     

人工伴侣辅助溶菌酶复性的影响因素

为了获得人工伴侣辅助蛋白质复性方法的广泛应用,本文以二硫苏糖醇还原、盐酸胍变性的溶菌酶为目标蛋白质,优化复性过程中的一些条件.首先确定了溶菌酶浓度为0.06 mg/mL时,复性的最佳氧化还原体系GSSG/GSH均为3 mmol/L;然后证明了要达到较高的复性收率,在水浴环境下,需要较长的时间和较大的β-CD浓度(24 h,CTAB/β-CD为1.2 mmol/L:14.4 mmol/L),收率可达90%以上.而在摇床环境下,利用较短时间和较低的β-CD浓度(1 h,CTAB/β-CD为1.2 mmol/L:4.8 mmol/L)就可以达到一定的复性收率(70%以上);进一步实验证明,若想在1 h内达到理想的复性效果,可以选用1.2 mmol/L:4.8 mmol/L的CTAB/β-CD,摇动10 min,然后保持静止,可达到70%以上的收率.