变性剂对重组牛肠激酶活性的影响

肠激酶(EK,EC 3.4.21.9)是一种在基因工程产品中广泛应用的工具酶.以小分子荧光物质Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β-萘胺为底物,采用荧光跟踪法研究了变性剂盐酸胍、硫脲、尿素对重组牛肠激酶(rEK)活力的影响及抑制动力学.结果表明:盐酸胍、硫脲、尿素均对该酶的活性有较强的抑制作用,它们对该酶的半抑制浓度(IC50)分别为0.025,0.080和0.750 mol/L.研究的3种变性剂对该酶的抑制均显示可逆抑制机理;抑制类型也均为竞争性类型,测定它们对酶的抑制常数KI分别为0.015,0.060和0.553 mol/L.     

羊毛的变性及变性羊毛阳离子染料染色

羊毛经阴离子型活性变性剂处理后，纤维侧基上被引入阴离子型基因，具有和腈纶纤维类似的结构。因而，变性羊毛能够用阳离子染料染色。增大变性剂的分子量、共轭双键数及相对疏水性，变性羊毛用阳离子染料染色时上染速率和上染率均可显著地增大，染色牢度也大为改善，但对酸性染料产生防染作用。从变性羊毛的红外吸收光谱图上可看到，在波数为１１５０～１２６０ｃｍ－１、１０１０～１０８０ｃｍ－１和６００—７００ｃｍ－１处均出现磺酸基的特征吸收峰。变性剂和羊毛间形成共价结合成为纤维侧基的一部分。变性羊毛表面的电性能有较大变化，但其物理机械性能如减溶解度、弹性、断裂强度等基本不受影响。     

变性剂和巯基修饰对黄精凝集素Ⅱ构象和活性的影响

采用圆二色谱、荧光光谱，研究了黄精凝集素Ⅱ（Polygonatum cyrtonema Hua.LectinⅡ,PCLⅡ）在4mol/L和6mol/L盐酸胍中，以及巯基修饰后，其活性和分子构象的变化关系，研究结果表明：PCL Ⅱ是一种稳定的蛋白质，巯基剂虽不影响其活性，但可使其分子构象发生变化，去除修饰剂后其结构部分能够恢复。在4mol/L盐酸胍中，PCL Ⅱ活性及构象可发生很大变化，去除盐酸胍后其活性恢复；6mol/L盐酸胍中，呈现典型的无规卷曲构象，活性完全丧失，去除盐酸胍后活性仍不能恢复，表明活性中心已遭到不可逆的破坏。     

温度、酸碱度和变性剂对黄花石蒜凝集素活性和构象的影响

采用荧光光谱研究了不同温度、pH和变性剂对黄花石蒜凝集素（Lycoris aurea agglutinin,简称LAA）凝血活性和分子构象的变化关系,结果表明：LAA具有较强的温度和酸碱度的耐受性,经过3种变性剂的处理都能使LAA分子构象发生不同程度的变化并导致活性的丧失,浓度为6 mol/L的盐酸胍和脲,20 mmol/L的SDS可以使LAA完全丧失凝血活性,荧光光谱的变化表明了这种变性过程具有阶段性.     

白芸豆凝集素的分子稳定性和光谱性质研究

经缓冲液抽提、CM-Sepharose、DEAE-Sepharose离子交换及Sephacryl S-200分子筛层析,从白芸豆种子纯化得到白芸豆凝集素(Phaseolus coccineus lectin,PCL)。SDS-PAGE和Sephacryl S-200凝胶过滤分析表明白芸豆凝集素是由两个30 kDa的单体组成的分子量约为56 kDa的同源二聚体蛋白。凝血活性结果表明白芸豆凝集素能凝集的兔血细胞和人ABO血型细胞,无血型专一性。其凝血活性在80 ℃以下和pH 3.0-10.0时保持稳定。脲、盐酸胍对PCL凝血活性的影响表明,随着变性剂浓度的升高,凝血活性逐渐丧失。不同温度、pH和不同浓度变性剂条件下PCL的荧光光谱分析表明PCL变性过程的阶段性。     

金属离子和变性剂对黄精凝集素Ⅱ构象与功能的影响

黄精凝集素II（Polygonatum cyrtonema Hua.Lectin II,PCLII)具有323nm的荧光发射峰和281．6nm的激发峰,其远紫外圆二色谱（CD谱）显示224nm负峰,分子中含有17．3％的α螺旋和45．8％的β折叠,在10mmol/L的SDS中,PCL II完全丧失兔红细胞凝集能力及促T－淋巴细胞有丝分裂活性,CD谱呈现双负峰的a螺旋构象,去除SDS后,则呈无规卷曲构象,此时,荧光发射峰红移而激发峰蓝移,PCL II仍完全失活,在EDTANa2溶液中,PCL II凝集红细胞能力及促淋巴细胞有丝分裂活性完全丧失,去除EDTA后,红细胞凝集活性完全恢复,但仍失去促淋巴细胞有丝分裂能力,PCL II二级结构变化不大,荧光光谱的变化表明微环境受到影响。     

应用PCR-DGGE技术解析MBR中微生物群落多样性

为了揭示膜生物反应器中活性污泥的微生物多样性,取样处理不同水质的膜生物反应器中的活性污泥,通过细胞裂解直接提取其中的基因组DNA,以细菌通用引物进行16S rRNA基因V3高变异区域PCR扩增,再将PCR产物(约240 bp)进行变性梯度凝胶电泳分离(变性剂梯度为30%～60%),获得表征污泥中微生物群落特征的DNA指纹图谱.研究表明,不同的膜生物反应器中既存在着共同的微生物种属也有各自特异的种属.相同的微生物种群在不同反应器中的优势地位不同,各自特有的微生物群落则是由于水质的不同经过长期演替而来.     

α-氨基酸在尿素水溶液中的粘度B系数

氨基酸是构成蛋白质的结构单元 ,尿素是较强的蛋白质变性剂 .因此 ,研究水溶液中氨基酸与尿素的相互作用对于探索蛋白质变性的分子机理、预测蛋白质的变性规律具有重要的意义 .在前期工作中 ,我们研究了 α-氨基酸在尿素 [1] 和乙酸钠[2 ] 水溶液中的体积性质 .作为水溶液中氨基酸与蛋白质变性剂相互作用系列研究的一部分 ,本文报道不同温度下 ( 2 78.1 5,2 88.1 5,2 98.1 5和 30 8.1 5K) ,甘氨基、DL-α-丙基酸、DL- α-氨基正丁酸、DL-缬氨酸、DL-亮氨酸、L-丝氨酸以及氨基酸分子的荷电端基 ( NH 3 ,COO-)和 CH2 基团在 5molkg-1…     

白芸豆凝集素的分子稳定性和光谱性质研究

经缓冲液抽提、CM-Sepharose、DEAE-Sepharose离子交换及Sephacryl S-200分子筛层析,从白芸豆种子纯化得到白芸豆凝集素(Phaseolus coccineus lectin,PCL).SDS-PAGE和Sephacryl S-200凝胶过滤分析表明白芸豆凝集素是由两个30 kD的单体组成的分子量约为56 kD的同源二聚体蛋白.凝血活性结果表明白芸豆凝集素能凝集的兔血细胞和人ABO血型细胞,无血型专一性.其凝血活性在80 ℃以下和pH 3.0~10.0时保持稳定.脲、盐     

丝绸的阳离子染料染色工艺研究

研究了用阳离子染料染丝绸的工艺过程和工艺条件，包括蚕丝化学变性剂的结构选择、用量、染浴ｐＨ值、助剂作用和升温曲线等．根据织物的上染百分率和染色牢度，优选出了可进行工业化生产的工艺过程和工艺条件．