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BYDV CP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生 总被引:4,自引:0,他引:4
用原生质体融合技术与PEG介导的直接转基因方法相结合,使高频率分裂的小麦济南177悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南177胚性意伤组织原生质体融合,形成具有分裂和分化能力的融合细胞;同时,利用PEG对原生质体的直接转基因作用,将带有抗病毒基因(BYDVCYgene)的质粒Ppp15与带有抗性选择标记基因的质粒严PBlActSN导入融合细胞中.经抗性筛选获得抗潮霉素(Hm)的阳性克隆并再生植株.对再生植株作PCR检测表明,CP基因已整合到转化植株的基因组中并稳定表达. 相似文献
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利用安全性转基因技术导入反义蜡质基因降低稻米直链淀粉含量 总被引:5,自引:0,他引:5
利用安全性转基因技术中的共转化法, 将分别含有p13W4双元载体(含有潮霉素抗性基因、gus报告基因以及反义蜡质基因片段)和p13W8双元载体(无潮霉素抗性基因和gus报告基因, 只含有反义蜡质基因片段)的根癌农杆菌以1:9的比例混合导入超2-10高产水稻新品系中, 获得34棵转基因植株. PCR分析转基因T0代植株, 结果显示, 有15株是共转化植株, 共转化率为44.1%. 利用p13W4双元载体上的gus报告基因从T1代种子中淘汰具有报告基因及抗性标记基因的转基因后代, 再利用PCR检测从T1代植株中获得只有反义蜡质基因的植株. Southern blot杂交分析证实, p13W8双元载体T-DNA已整合进入无抗性标记及报告基因的转基因后代基因组中. T2代成熟种子直链淀粉含量分析显示, 转基因植株糙米直链淀粉含量比对照有不同程度的下降, 幅度最大的比对照降低28.61%. 由于获得的转基因后代只有目的基因而无抗性选择标记基因和报告基因, 而且水稻中的稻米直链淀粉含量已降低, 它们既可被用于筛选软米材料, 也可视为是能够用于其他水稻稻米食味品质改良的水稻新资源. 相似文献
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基因枪转多基因库安托杨的获得 总被引:3,自引:0,他引:3
通过基因枪共转化方法将枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因(SacB)、透明颤菌血红蛋白基因(vgb)、双价抗蛀干害虫基因(BtCry3A+OC-Ⅰ)、调节基因JERF36及报告基因NPTⅡ等外源基因导入库安托杨, 共获得25株抗性植株. PCR及Southern杂交结果表明, 外源基因已整合到库安托杨基因组中, 其中7株含有上述全部5个外源基因. BtCry3A ELISA实验表明, 上述7株库安托杨BtCry3A基因已得到表达. 且上述转基因植株在滨海盐碱地中生长良好. 相似文献
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细菌双杂交系统是新近建立的一种研究蛋白质间相互作用的方法.应用细菌双杂交系统,分别以pBT、pTRG诱饵质粒构建编码WSSV基因组DNA随机片段的融合表达质粒pBT-wssv、pTRG-wssv.重组质粒共转化双杂交报告菌株XLl-Blue MRF′,通过LB-TCK平板筛选对虾白斑综合征病毒中有相互作用的蛋白质.本研究中我们构建了WSSV基因组细菌双杂交系统,用于筛选WSSV中有相互作用的蛋白,为该病毒功能基因组的研究打下良好的基础. 相似文献
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转基因水稻纯系对褐飞虱的抗性研究 总被引:4,自引:0,他引:4
利用基因枪法将含潮霉素抗性基因、GUS报告基因和雪花莲凝集基因的2个质粒pWRG1515和pRSSGA1共同转化粳稻品种鄂宜105的成熟胚诱导的愈伤组织,从轰击的152块愈伤组织中共再生出26株独立转基因植株,PCR/Southern印迹法分析发现,73%的转基因植株含有所有3个外源基因,遗传分析证实外泊基因在转基因植株后代中以孟德尔方式遗传,从其R1代亲本为孟德尔3:1方式遗传的R2代中,鉴定出 相似文献
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植物抗虫基因工程近年来取得了较大进展,但是,昆虫对转基因植株B.t.杀虫蛋白产生抗性是一个值得重视的问题.与B.t.δ-endotoxin不同,蛋白酶抑制剂是来自于植物本身的一种蛋白质,它在植物组织中的积累主要有两种:第一种,它作为发育特定阶段的产物,存在于大多数植物的贮存器官中.第二种,在番茄等植物的叶片中,蛋白酶抑制剂Ⅰ和Ⅱ的积累受 相似文献
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采用了一种简单而快速的全长cDNA文库构建法,即SMART法,并应用cDNA片段与质粒共转化大肠杆菌的方法,成功地构建了蚕豆全植株cDNA文库. 相似文献
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基因枪介导质粒共转化整合模式的FISH研究 总被引:4,自引:0,他引:4
利用多色荧光原位杂交(Multi-color FISH),在基因枪介导共转化的转基因水稻中检出了目的基因barnase-psl片段和报告基因pHcintG。在供试两单株的染色体上,这两个外源基因各有2-3个整合位点。多数情况下,barnase-psl片段与pHcintG整合在染色体的同一位置。同时,选株Q13的伸展DNA纤维荧光原位杂交(Fiber FISH)显示,两基因表现为衔接重复,重复间具有短的间隔。结合Southern杂交结果,对基因枪介导共转化可能的整合模式进行了分析。 相似文献
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实验采用PEG介导法转化小麦,用GUS基因作为标志,用荧光法测定Actl-GUS、Emu-GUS、35S-GUS三种质粒转化小麦细胞后的瞬间表达强度,以比较Actl、Emu、35S三种启动子在小表中的表达强度.结果表明,Actl和Emu的强度大致相等,均比35S强.采用Emu为启动子带BYDVCP基因的质粒和经改造过的Act1为启动子带有抗潮霉素选择标记基因的质粒共转化小麦“济南177”的原生质体.转化6d后,用潮霉素进行筛选,最后得到两块抗潮霉素的愈伤组织,转化后4个月,经PCR检测,证明CP基因已整合进一块愈伤组织的细胞基因组中. 相似文献