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1.
目的:探讨优化vMIP-Ⅱ/MBP融合蛋白表达载体pMal在原核细胞中的表达条件,并对其表达产物进行纯化。方法:通过接菌,诱导表达,实验了解诱导时不同的温度,诱导时间,IPTG浓度对蛋白表达量的影响,并进行SDS-聚丙烯酰氨凝胶(SDS-PAGE)电泳分析。结果:发现该菌在含0.3mmol/L IPTG的TB培养基中,28℃诱导表达4h,可使诱导蛋白表达达量占菌体蛋白总量的10%。结论:vMIP-Ⅱ/MBP的表达受温度条件影响较大,低温诱导时表达水平较高,从而为该工程菌的中试提供了实验基础。 相似文献
2.
吴应文 《兰州大学学报(自然科学版)》1992,(3)
在接种了血癌(L—7712)及腹水癌(Hep.A)的小鼠腹水癌细胞中存在远高于正常细胞的脂酶(Lipase)活力.本文通过免疫亲和层析方法从小鼠腹水癌细胞中纯化了该脂酶,比活力达到2000国际单位/mg.蛋白.经 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,纯度达电泳纯,为单亚基酶.分子量65kd.经等电聚焦电冰分析,等电点(PI)为5.3. 相似文献
3.
尿激酶亲和层析分离中吸附和洗脱过程的速率模型模拟 总被引:1,自引:0,他引:1
采用非平衡层析速率模型,对尿激酶的亲和层析过程进行了模拟计算。利用亲和层析,可以将粗品原料净化为高纯度尿激酶产品;层析所用的亲和载体是采用对氨基苯甲脒作为配基,将琼脂糖凝胶进行活化制得的。通过问歇实验,测定了吸附等温线并进行吸附动力学研究。借助于VERSE—LC模拟软件,采用速率模型作为基本方程,对亲和层析的实验现象进行了数值模拟分析,与实验结果进行对比发现,速率模型可以较准确地描述固定床中的亲和层析过程。 相似文献
4.
5.
用BlueSepharose·CL.6B亲和层析方法分离纯化的甲鱼LDH_5、甲鱼LDH_1和北京鸭LDH_5,进行比较研究。从分子量、等电点、氨基酸组成、平均摩尔差异百分比及在BlueSepharose·CL·6B层析柱上洗脱特性几方面进行比较,结果表明,两个不同纲的动物(甲鱼和北京鸭)的LDH_5的A亚基之间的差异大于同一种动物的LDH_5的A亚基和B亚基之间的差异,并说明不同纲的动物LDH_5之间具有同源性。 相似文献
6.
人组织型纤溶酶原激活剂(t—PA)。DNA重组在表达质粒pDR720中,在E.coliC600中获得了表达,表达水平为2%.以醋酸钟显色PAGE凝胶回收t—PA表达条带,进行复性处理.R性产物经Benzamidine—Sepharose4B,Lysine—Sepharose4B亲和层析,纯化得到SDS—PAGE银染一条带纯度,比活为为4,000mol/s·g的人t—PA. 相似文献
7.
用抗基因工程人γ-干扰素单克隆抗体(2A12)细胞株亲和层析从表达人γ-干扰素的大肠杆菌抽提液中纯化经稀释复性后的γ-干扰素。一步纯化后的γ-干扰素含量达95%以上,蛋白质的比活性达 1.2×10u/g,收率为78%。洗脱液用 0.5mol/LNaCI的 PBS溶液,洗脱率达92.8%。 相似文献
8.
以壳聚糖为载体、肝素为配基和以琼脂糖4B为载体、肝素为配基分别合成2种亲和吸附剂,用以纯化猪凝血酶,并对两者的纯化效果进行比较.结果表明对于猪凝血酶的分离提纯,前者明显优于后者.前者的酶比活为1553.7U*mg-1,提纯11.5倍,收率为78.8%;后者的酶比活为1126.4U*mg-1,提纯8.8倍,收率为61.4%.前者无明显压床,流速均匀,而且前者的价格低廉,易于得到. 相似文献
9.
利用聚乙烯系大孔聚合物与间氨基苯硼酸偶联制备亲和介质,配基密度为每克湿胶0.92mmol。最佳吸附条件为pH9.0和2.0mol/LNaCl;最佳洗脱条件为0.1mol/LHCl。测定了吸附等温线,算得解离常数Kd为0.155mol/L,最大吸附量qm为每克湿胶78.8mg。将含有胸腺嘧啶的5-甲基尿苷溶液进行亲和层析,5-甲基尿苷收率为56.3%。 相似文献
10.
心肌肌钙蛋白Ⅰ具有极强的心脏特异性,可以通过检测患者血清内心肌肌钙蛋白Ⅰ的含量来诊断急性心肌梗塞。利用肌钙蛋白C和肌钙蛋白Ⅰ在钙离子存在下具有特异性结合的性质,制成了肌钙蛋白C亲和凝胶。利用肌钙蛋白C-肌钙蛋白Ⅰ亲和层析,提取和纯化了人和牛心肌肌钙蛋白Ⅰ,由100g心肌中可以提取到60mg,以后可用来制备抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ的单克隆抗体杂交瘤细胞。 相似文献