三叶青两个肌动蛋白基因片段的克隆及其分析

根据GenBank中登录的植物肌动蛋白保守序列设计1对引物,对三叶青的块根进行RT‐PCR ,在1次扩增中得到2个不同的肌动蛋白基因片段,分别命名为 ThAct1和 ThAct2．测序结果显示：ThAct1基因片段长度为867 bp ,编码252个氨基酸;ThAct2基因片段长度为1079 bp ,编码152个氨基酸．经Blast分析,ThAct1和ThAct2基因均属于NBD＿sugar‐kinase＿HSP70＿actin superfamily家族,与其它物种Actin基因序列和编码的蛋白质均具有同源性．RT‐PCR结果初步表明：在茎、普通根和块根中 ThAct1和 ThAct2基因的表达未见差异;但在叶中,ThAct1的表达稍强,而 ThAct2的表达稍弱．另外,在茎、普通根和块根中,ThAct1表达比ThAct2强;但在叶中 ThAct1表达比ThAct2弱．结果为分析肌动蛋白基因在三叶青块根发育中的功能奠定了基础;获得的肌动蛋白也可以作为内参基因,在三叶青功能基因组的研究中用于其它基因的定量表达分析．     

生物技术在药用植物三叶青中的应用研究进展

三叶青是一种珍稀的中草药,其提取物含有三叶青黄酮、β-谷甾醇和多糖等,具有良好的抗肿瘤作用,临床上已经用于抗癌、抗艾滋病毒,治疗血液病、心脑血管疾病、肝炎和病毒性脑膜炎等.该文从三叶青的人工栽培、离体快速繁殖和细胞培养、药用活性成分分析等方面,综述了生物技术应用于三叶青中的研究进展,并对今后研究方向进行了展望.     

三叶青无性扦插繁殖方法研究

为探讨高效的三叶青扦插繁殖方法,采用五因素四水平正交试验设计,以生根率、平均生根数和平均根长为扦插生根质量的指标,研究插穗类型、扦插基质、植物生长调节物质、处理浓度、处理时间对三叶青扦插繁殖生根的影响.结果表明,对生根质量指数影响效果最大的是扦插基质,其次是植物生长调节剂,处理浓度排第三,处理时间排第四,影响效果最小的是插穗类型.插穗类型为半木质化带二片叶,扦插基质为新鲜黄泥,植物生长调节剂为吲哚-3-丁酸(indole-3-butyric acid,IBA),处理的质量浓度为100 mg/L,处理时间为0.5 h,三叶青生根质量效果最佳.     

响应面法优化纤维素酶提取三叶青多糖的工艺研究

为了优化三叶青多糖的酶法提取工艺,选用纤维素酶提取三叶青多糖。通过单因素试验法和响应面分析法,考察酶加量、酶解温度、酶解时间、水料比这4个因素对三叶青多糖提取率的影响。得到的最佳提取条件为:酶加量0.274%,酶解温度60.5℃,酶解时间62.4 min,水料比25.8∶1(体积∶质量,mL/g),此条件下三叶青多糖的实际提取率为10.47%,与理论最佳提取率10.43%相比,相对误差为0.38%。此结果表明,运用响应面法优化得到的工艺条件准确可靠,能够真实地反映各因素对三叶青多糖提取率的影响,该提取工艺稳定合理、客观可行。     

生物技术在药用植物三叶青中的应用研究进展

三叶青是一种珍稀的中草药,其提取物含有三叶青黄酮、β-谷甾醇和多糖等,具有良好的抗肿瘤作用,临床上已经用于抗癌、抗艾滋病毒,治疗血液病、心脑血管疾病、肝炎和病毒性脑膜炎等.该文从三叶青的人工栽培、离体快速繁殖和细胞培养、药用活性成分分析等方面,综述了生物技术应用于三叶青中的研究进展,并对今后研究方向进行了展望.     

三叶青根多糖对HepG2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨三叶青根多糖(RTP)对肝癌细胞HepG2增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制.方法:不同质量浓度(0.65、1.25、2.5、5、7.5、10 mg/mL)的RTP作用于肝细胞L-02不同时间(24、48和72 h),MTT法检测细胞增殖,筛选出对肝细胞L-02无毒性的RTP质量浓度.对肝细胞L-02无毒性质量浓度的RTP作用于HepG2细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞增殖,筛选出RTP对HepG2细胞的最佳作用质量浓度和时间.最佳质量浓度的RTP干预HepG2细胞一定时间(最佳作用时间)后,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,qRT-PCR法和Western Blot法分别检测细胞中P21、Cyclin D1、Bcl-2、Bax、E-cadherin和MMP-2的mRNA和蛋白表达水平,qRT-PCR检测细胞中miR-151表达水平.转染miR-151抑制剂抑制HepG2细胞中miR-151表达,检测抑制miR-151表达后HepG2细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中P21、Cyclin D1、Bcl-2、Bax、E-cadherin和MMP-2的mRNA和蛋白表达情况.结果:低质量浓度(0.65、1.25、2.5 mg/mL)RTP对肝细胞L-02无毒性.RTP作用HepG2细胞的最佳作用质量浓度和时间分别为1.25 mg/mL、48 h,1.25 mg/mL的RTP及抑制miR-151表达均可降低HepG2细胞活性、迁移和侵袭细胞数及细胞中Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2的mRNA和蛋白表达水平(P0.05),提高HepG2细胞凋亡率及细胞中P21、Bax和E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平(P0.05).并且RTP可抑制HepG2细胞中miR-151表达.过表达miR-151且同时用1.25 mg/mL的RTP作用HepG2细胞时,细胞活性、迁移和侵袭数及细胞中Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2的mRNA和蛋白表达水平升高(P0.05),细胞凋亡率及细胞中P21、Bax和E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平降低(P0.05).结论:RTP可抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调miR-151表达有关.     

三叶青ThMYB1及ThMYB2转录因子的克隆及生物信息学分析

三叶青块根内黄酮类化合物对肿瘤的治疗有积极作用，MYB类转录因子在调控植物次生代谢等生物过程中发挥着重要作用，特别是在黄酮类化合物的合成代谢中。克隆三叶青块根中表达丰度最高的两个ThMYB转录因子的cDNA,并对其进行初步的生物学信息分析。经PCR扩增并测序后得到片段长度为1 450bp的ThMYB1及856bp的ThMYB2的扩增产物；生物信息学分析发现，ThMYB1和ThMYB2蛋白质序列与葡萄(Vitis vinifera)及河葡萄(Vitis riparia)的MYB转录因子相似度最高，分别为80.50%及95.93%;信号肽分析表明两种蛋白质均为非分泌蛋白质，属于亲水性蛋白质；细胞亚定位分析表明ThMYB1和ThMYB2位于细胞核的概率最高；蛋白质保守域的分析表明ThMYB1编码蛋白质含有一个SHAQKYF类保守域和一个MYB-CC型转换因子，属于R2R3-MYB亚家族，ThMYB2推测蛋白质存在一个PLN 03212超家族结构域，属于1R-MYB/MYB-related亚家族；系统进化树分析表明ThMYB1与ThMYB2两种推测蛋白质序列相似度较低。实验结果为后续ThMYB...