N-乙酰氨基葡萄糖对绛红小单孢菌合成庆大霉素的影响

研究了N-乙酰氨基葡萄糖对绛红小单孢菌产素的影响,实验探索了N-乙酰氨基葡萄糖添加工艺,在250mL摇瓶发酵过程中培养48h,60h分别添加0.05%,0.15%N-乙酰氨基葡萄糖可使庆大霉素生测效价达2 030U/mL,较对照1 228U/mL提高了65%以上(三次平均基本一致);5L发酵罐试产三批次发酵终结,生测效价平均为1 727U/mL(厡工艺1 097U/mL)提高了57%,效果十分明显.同时测定了发酵过程中菌体代谢各种参数的变化,证明了N-乙酰氨基葡萄糖在绛红小单孢菌生物合成中的促进作用.本方法操作简单,基本不改变原工艺,生产成本低廉,对提高庆大霉素产量效果非常明显.     

花椰菜天然钙调素抗体的特性及其ELISA定量法的建立

钙调素是一种具有多种调节功能的钙结合蛋白质，其免疫原性很弱，本文采用两次基础免疫和多次加强免疫的方法，获得了免疫花椰菜天然钙调素抗血清，用免疫双扩散法鉴定，其效价为１：３２钙调节不易与固相载体结合，我们先用０．２％戊二醛处理聚苯乙烯板载体，再用于包被钙调素，在上述基础上建立了定量测定植物钙调素的竞争性酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）技术及检测动物血清中抗钙调素抗体的间接ＥＬＩＳＡ技术。     

一种适用于教学的酶联免疫吸附试验的抗原抗体系统制备

目的:探讨设计一种教学成本低、便于教学使用、有助于培养医学生综合实验设计能力和提高实验基本操作技能的酶联免疫吸附实验抗原抗体系统.方法:以提纯的人IgG免疫家兔获取兔抗人IgG抗体,再用其包被酶标反应板,以人血清(人IgG)作抗原,用酶标记羊抗人IgG抗体结合抗原及催化底物显色反应.结果:该双抗体夹心法,底物显色反应清楚肉眼即可作出判定,非特异干扰极小.结论:我们设计的酶联免疫吸附实验-双抗体夹心法原理清晰、便于理解和掌握、教学成本较低、结果易于观察、便于教学大量使用.     

重组腺相关病毒基因药物三种滴度的比较与分析

采用酶联免疫吸附测定(ELISA)、实时荧光定量聚合酶链反应(Q-PCR)和转导方法对重组腺相关病毒(rAAV)的衣壳滴度、基因组滴度、转导滴度进行定量,并比较衣壳滴度/基因组滴度(P/GC)和基因组滴度/转导滴度(GC/TU).实验结果表明:3批rAAV的平均衣壳滴度为3.65×10¹³ P·mL^-1,平均基因组滴度为8.67×10¹¹ GC·mL^-1,平均转导滴度为9.85×10⁹ TU·mL^-1,P/GC平均值为41.70,GC/TU平均值为88.20,P/GC和GC/TU平均值接近于AAV2标准品,说明文中方法的制备工艺成熟、稳定,制备的rAAV感染活性较高.     

地衣杆菌抗生素的发酵及效价测定

为了弄清抗生素在不同发酵条件下其效价高低,采用管碟法[1～3]在不同的发酵条件下研究抗生素发酵的最佳条件,结果表明:在48h、pH7.5和35℃发酵条件下,抑菌圈直径最大为38.083 mm,效价最高为3 706.27μg/mL.这项研究分别是24h时的1.105倍、pH5时的1.145倍和20℃时的1.095倍,为缩短生产周期和提高产量提供了科学依据.     

反复冻融次数和不同保存温度对伪狂犬病毒的神经环路标记效果的影响

伪狂犬病毒(pseudorabies virus, PRV)是常用于神经环路示踪研究的嗜神经病毒工具之一,然而目前缺乏 PRV的保存条件对其感染滴度以及在体神经环路示踪效果影响的研究.首先,将2 h内在－80℃及室温下同一批次的PRV分别进行1～4次冻融,利用噬斑法在BHK-21细胞上检测其滴度,研究结果显示1～3次冻融对PRV的滴度改变无显著影响,而第4次冻融使PRV病毒的滴度显著下降.其次,从－80℃冰箱中取出同一批次的两份PRV,将其冻融1次,分别在－80℃和－20℃保存两周后,利用噬斑法在BHK-21细胞上检测其滴度;同时,将两份PRV利用在体立体定位分别注射于小鼠齿状回(dentate gyrus, DG)区,取相同的感染时间点,对DG输入环路标记效果进行分析,研究得出不同温度下长期保存对PRV的滴度及标记效果有较大影响.该研究结果对于PRV病毒的保存及其在神经环路标记中的应用具有一定的参考意义.     

轮状病毒间接免疫荧光的检测方法

以兔抗SA11多克隆抗体为一抗、 Alexa 488标记的山羊抗兔抗体为二抗, 通过对反应条件的优化建立轮状病毒（RV）检测的间接免疫荧光法（IFA）. 实验结果表明, IFA最佳工作条件为: MA104细胞密度为每孔2×10⁴个, 胰酶活化轮状病毒质量浓度为1 μg/mL, 培养时间为18 h, 一抗最适稀释度为1∶800, 二抗最适稀释度为1∶500.     

黄芪多糖对新城疫弱毒疫苗免疫雏鸡血凝抑制抗体水平的影响

40只1日龄健康雏鸡随机分成4组,Ⅰ组为对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为黄芪多糖试验组,每组10只,置于相同的条件下饲养,在第5日龄时对Ⅱ-Ⅳ组每只鸡分别颈部皮下注射0.1mg、0.3mg和0.5mg黄芪多糖注射液,对照组注射生理盐水,每天1次,连续3d,并于第7和21日龄时采用滴鼻、点眼的方式给各组鸡接种新城疫Lasota弱毒疫苗,用β-微量法检测血清中血凝抑制抗体效价的动态变化。结果表明,黄芪多糖对鸡新城疫免疫效果有明显的促进作用,与对照组(Ⅰ组)差异显著,其中以黄芪多糖0.5 mg/只时为最佳使用剂量。由此可见,黄芪多糖在一定剂量范围内可明显增强对鸡新城疫免疫的效果。     

逆转录病毒载体设计对ANTI—RAS核酶基因转移效率的影响

将ａｎｔｉ－ｒａｓ核酶基因Ｒ８克隆于不同的逆转录病毒载体，并导入逆转录病毒包装细胞质ＰＡ３１７，得到具一次感染性的缺失性病毒，通过测定病毒滴度选择Ｒ８基因的高效重组转录病毒载体。     

核不均一性核糖核蛋白H2（hnRNPH2）对单纯疱疹病毒（HSVI）复制影响

本文研究了单纯疱疹病毒（HSVI）在感染与复制过程中影响宿主细胞RNA转录，蛋白表达，进而为病毒的潜伏和持续感染创造必要条件．采用基于2-DE分析，人正常肝细胞L-02细胞核不均一性核糖核蛋白H2（heterogeneous nutlear ribonucleoprotein H2，hnRNPH2）在感染HSVI前后存在表达差异，构建pcDNA-hnRNPH2真核表达载体及hnRNPH2稳定转染的293T细胞系的方法，研究在核不均一性核糖核蛋白H2（hnRNPH2）稳定过表达后对HSVI病毒复制周期的影响．结果表明，病毒滴度和生长曲线显示，hnRNPH2可以显著影响病毒复制周期．过表达hnRNPh2的细胞系与对照相比，其病毒滴度明显下降，hnRNPH2在HSVI病毒复制中起到比较明显的抑制作用，其作用机理还有待进一步研究．