乳酸对肌酸激酶活性抑制作用的研究

应用酶活测定的方法分析了肌酸激酶在不同浓度乳酸中的活性变化．实验结果说明在失活过程中没有蛋白质的聚沉；肌酸激酶的失活遵循一级反应的一相过程；失活与乳酸浓度和作用时间呈正相关．通过对比实验结果显示，乳酸是通过其解离状态的H^ 改变了机体PH值而影响肌酸激酶活性的，并且就乳酸对肌酸激酶影响及其意义进行探讨．     

肌酸激酶MM亚型不连续琼脂糖凝胶电泳法的建立

肌酸激酶同工酶(CK)主要分为CK—MM、CK—MB、CK—BB,而CK—MM可以进一步分离为MM_1、MM_2、MM_3等亚型。急性心肌梗塞(AMI)时,CK—MM_3大量入血而升高,特别是MM_3/MM_1的比值升高,对AMI具有极好的特异性和早期诊断的价值。此外,对患者是否使用溶栓疗法具有临床应用意义。我们采用不连续缓冲系统电泳分离CK—MM亚型,方法简便,分辨率好,便于普及推广。     

丙酮酸、乳酸对体外肌酸激酶活性的抑制作用

 应用酶活测定的方法分析了肌酸激酶在不同浓度的乳酸、丙酮酸中的活性变化.实验结果说明在失活过程中没有蛋白质的聚沉,失活与乳酸浓度、丙酮酸的浓度呈正相关.通过对比实验结果提示,丙酮酸离子、乳酸离子对肌酸激酶没有明显影响,丙酮酸、乳酸是通过其解离状态的H⁺改变了机体pH值而影响肌酸激酶活性的,作者就丙酮酸、乳酸对肌酸激酶影响及其意义进行探讨.     

磁场对肌酸激酶的影响

建立了流动注射和光纤光度法测定肌酸激酶（Ｃｋ）活性的方法。求测了Ｃｋ催化反应的米氏常数ｋｍ和反应活化能Ｅ,研究了磁场对Ｃｋ催化活性的影响。较长时间磁化Ｃｋ溶液和测活溶液,分别可使Ｃｋ加速失活和活性升高,１００ｍＴ磁场磁化处理测活液１５ｈ可使Ｃｋ催化反应速度增加４３．７％。     

一次力竭性离心运动对大鼠血清肌酸激酶(CK)活性的影响

通过建立大鼠下坡跑运动损伤模型,研究一次力竭性离心运动后不同时刻大鼠血清CK从亚细胞水平探讨一次力竭性离心运动后,骨骼肌超微结构损伤发生的机制,为运动训练和大众健身提供理论依据.将雄性SD大鼠48只随机分为6组(每组8只):安静对照组(C),运动后24h组(E2),运动后即刻组(E0),运动后48h组(E3),运动后12 h组(E1),运动后72 h组(E4),以速度16 m/min,坡度-16°进行跑台运动,运动100 min后,休息5 min,然后再运动100 min.在不同时刻观察大鼠血清CK活性的变化,结果表明:运动后即刻血清CK活性(2 035.42±426.49 U/L)与对照组血清CK活性(293.66±76.07 U/L)相比,非常显著的增高(P0.01),达到了峰值,而后逐渐恢复,运动后72 h组血清CK活性(425.51±143.34 U/L)与即刻组血清CK活性相比已显著恢复(P0.01),与对照组相比没有统计学意义(P0.05),但没有完全恢复到安静时水平.一次力竭性离心运动后即刻大鼠血清CK活性显著增高,而后逐渐恢复,运动后72h接近正常,血清CK活性的变化能够反映运动后骨骼肌超微结构损伤的状况.     

冬眠动物达乌尔黄鼠离体心脏对缺灌和再灌损伤的耐受性

秋季未入眠之达乌尔黄鼠离体心脏用Langendorff方法灌流,平衡10min,全心缺灌15min,然后再灌10min。于缺灌期和再灌期分别定时收集心脏冠脉流出液,测定流份中肌酸激酶(CK)的活性(U·L^－1),同时记录心电图和心脏收缩力。此外,用恒温动物大鼠作为冬眠动物黄鼠的实验对照,经受完全相同的实验处理。缺灌15 min期内,两种动物心脏皆有大量CK释放,释放量与缺灌时间呈线性关系。但黄鼠各采样点CK释放值都低于大鼠,提示黄鼠心脏对缺灌损伤的耐受性强于大鼠。再灌期大鼠心脏有两个CK释放峰,而黄鼠仅有第Ⅰ峰,且其活性值(179±32U·L^－1)显著低于大鼠(255±17 U·L^－1,P<0.05)。再灌期黄鼠室颤和室速发生率以及心脏收缩幅度下降百分率皆显著低于大鼠(P<0.01)。上述结果证明,与大鼠相比较,冬眠动物黄鼠心脏对缺灌和再灌损伤具有较强的耐受性。     

补中益气汤对阿霉素诱导的大鼠肾病的作用

以阿霉素肾病大鼠模型为研究对象,采用了血液生化学和组织病理学方法,分析了补中益气汤对阿霉素肾病的作用和可能的机制.Wistar雄性大鼠60只,随机分为对照组(n=10)、模型组(n=10)、激素组(n=10)和补中益气汤低剂量组(n=10)、中剂量组(n=10)和高剂量组(n=10).采用阿霉素二次尾静脉注射法(首次6 mg/kg,二次3 mg/kg)制作阿霉素肾病的大鼠模型.在阿霉素注射后7,21,42 d将大鼠置于代谢笼中分别收集24 h尿液,测定24 h尿蛋白.末次给药后,眼眶取血检测肾功能指标,包括肌肝SCR (se-rum creatine)和尿素氮BUN (blood urea nitrogen);处死大鼠并观察肾组织病理改变.结果表明:补中益气汤可以显著减少尿蛋白的排泄并缓解肾皮质上皮细胞的病理学改变.这提示补中益气汤对阿霉素大鼠能够通过改善尿蛋白的排泄,缓解肾脏病理改变,从而起到对肾脏的保护作用.     

烟草节杆菌02181肌酸酶的纯化及理化特性

采用DEAE-纤维素和羟基磷灰石层析联合使用的纯化程序,从烟草节杆菌02181株提取纯化了肌酸酶.比活性由0.92 U/mg上升至124.44 U/mg,酶被提纯了135.26倍,在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈单一区带,最终收率达52.95%.特性研究显示此酶的相对分子量为84500,等电点为4.80,在磷酸盐缓冲体系中,最适pH为6.50,pH7.00环境下耐受性最好,最适温度为35℃,米氏常数(Km)为46.50 mmol/L,最大反应速度(Vmax)为8.20 μmol/min.Cu2 、SDS可使酶完全失活,Hg2 、Cd2 、Zn2 和Fe3 明显抑制酶活性,Mg2 、Mn2 、Brij 35、Triton X-100和邻菲饶啉对酶活性有一定的抑制作用,EDTA对酶活性无明显影响,而Ca2 和NaN3对酶有一定的激活作用.络合剂邻菲饶啉和EDTA对酶活性的抑制试验表明此酶属于金属酶类.     

混合拥挤试剂对人肌肌酸激酶稳定性的影响作用研究

为了更加真实地模拟细胞内环境,在人肌肌酸激酶(HCK)的去折叠环境中同时加入了大分子拥挤试剂(葡聚糖)和小分子渗透剂(蔗糖),采用酶活性、荧光发射谱和溶液浊度检测等方法研究肌酸激酶在含有蔗糖和葡聚糖的混合拥挤环境中的稳定性,结果表明在肌酸激酶盐酸胍变性过程中,蔗糖不仅抑制肌酸激酶酶活性的丧失,还稳定肌酸激酶的构象,而葡聚糖对肌酸激酶保护能力相对较弱.对于热变性过程,相同质量浓度的蔗糖和葡聚糖能同等程度地减缓肌酸激酶活性的丧失,并抑制聚沉的产生.在葡聚糖和蔗糖同时存在的情况下,两者的保护作用可以累加,并共同维持肌酸激酶的稳定性.     

大熊猫肌肉肌酸激酶的纯化与性质

用改进的Ｋｕｂｙ等人方法从大熊猫骨骼肌中纯化了肌酸激酶，并对此酶的某些性质进行了研究。纯化倍数为 ３５．７；收率１７．３％；比活力为 ５５．３Ｕ／ｍｇ；等电点为 ６．６０。聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为一条带。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为４２ ０００，总分子量为 ８４ ０００，该酶是由两个相同亚基组成的二聚体。酶对肌酸的Ｋｍ 为 ５．２６ｍｍｏｌ／Ｌ；对ＡＴＰ的 Ｋｍ为 ０．７４ｍｍｏｌ／Ｌ，酶的最适温度是 ３０～３６℃；酶的最适ｐＨ大于８．０。