鸡新城疫免疫胶体金诊断技术

鸡新城疫是鸡的一种高度感染和致死性疾病,是由一种侵害呼吸道、胃肠道以及中枢神经系统的新城疫病毒（NDV）所引起的。病毒存在于病鸡的血液、脑、内脏、粪便和口鼻中,国内外对本病的控制仍没有完全解决鸡新城疫对养鸡业有着巨大的威胁。所以有必要建立一种快速、简便、准确的检测方法用于鸡新城疫的诊断。胶体金技术最早是Faulk等于1971年报道的应用于电镜检查技术的一种示踪技术。与传统方法比较,由于胶体金具有肉眼可观察的红色,所以以这种技术为基础开发的检测试剂盒有快捷、准确、高特异性、高敏感性的特点,灵敏度可达0．5-1ng。适用于各级医院、卫生所、家庭个人诊断、保健、体检。目前以此方法为基础发展起来的检测试剂盒涉及范围相当广泛．包括HcG等激素、肿瘤标志物、心血管标志物、传染病的抗原与抗体的检测等。采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒．标记纯化的鸡新城疫抗体．并包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的鸡新城疫抗体和纯化的兔抗鸡抗体包被在硝酸纤维素膜上,组装成鸡新城疫快速诊断试纸条。当检样中含有鸡新城瘦病毒抗原时,试纸条上出现两条红线,为阳性;当检样中不合有鸡新城疫病毒抗原时,试纸条出现一条红线．为阴性。本试验建立的胶体金免疫层析法（GICA）是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可用于鸡新城疫诊断,也可用于鸡新城疫的流行病学调查．具有推广价值。     

免疫胶体金对小鼠巨噬细胞和NK细胞活性的影响

实验设计了4种直径和3种剂量12个组合的胶体金对小白鼠进行注射处理：采用MTT法和LDH短程释放法．测定了腹腔巨嗜细胞活性和脾脏NK细胞活性．结果表明：不同直径和剂量的CG对机体有不同程度的影响。其中直径15nm．10nmCG的0．3mL和0．2mL剂量组可显著提高腹腔巨噬细胞活性及脾脏NK细胞杀伤活性,0．1mL剂量组虽有提高但不显著;直径5nm．20nm各个剂量组效果的波动较大,中、高剂量组对四项指标起促进作用但不显著．低剂量组则没有促进作用。证明了15nm和10nm中高剂量的胶体金可显著提高小鼠巨噬细胞功能和脾脏NK细胞活性。     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

目的探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法.方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记鼠抗人IgG单克隆抗体,制成免疫层析测试条.血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg,HEAg)、抗体(羊抗鼠lgG)结合形成肉眼可见的红色线条.结果自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份,各单项指标抗-HAV IgG,抗-HEV IgG两法总符合率分别为98.9%,98.9%,检测灵敏度可达1μg/L.结论用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备,有广泛的应用价值.     

胶体金探针的制备

研究了直径１５ｎｍ胶体金的制备方法，制得金标记ＳＰＡ，并对其活性进行了研究，所制得的胶体金探针稳定，可靠，有较好的生物活性。     

胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析方法,建立对人绒毛膜促性腺激素的快速定量检测方法．该检测方法可以在15min内完成对HCG的定量检测,灵敏度可达25mIU／mL,线性范围25～10000mIU／mL．与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激素（hTSH）、人卵泡刺激素均无交叉反应,所建立的检测人绒毛膜促性腺激素的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的人绒毛膜促性腺激素,在异位妊娠的早期诊断及过程监控中具有较为广阔的应用前景．     

Analysis on Results of Rotavirus Detection in 1813 Cases of Infants with Diarrhea

目的 了解孝感市中心医院1个月～5岁之间腹泻患儿轮状病毒(RV)的感染情况.方法 采集腹泻患儿的新鲜粪便标本,采用A群轮状病毒诊断试剂盒,对该院2008～ 2010年住院部儿科及感染腹泻患儿的粪便标本进行A群轮状病毒的检测.结果 在1813例腹泻的患儿粪便中检查536例RV阳性标本,阳性率为29.6％;其中秋季779例,检出RV阳性标本320例,占41.2％;冬季544例,检出RV阳性标本174例,占32％;年龄段在0～0.5岁婴幼儿感染率达到26.2％;0.5 ～2岁婴幼儿感染率为46.7％,随着年龄增大,轮状病毒感染率随之降低.结论 RV感染是导致婴幼儿腹泻的主要原因之一,以6个月～2岁组为A群轮状病毒的高发年龄组,每年秋冬季为感染高发期.从粪便中检测RV抗原,对婴幼儿感染性与病毒性腹泻的早期快速鉴别诊断提供了可靠依据.     

适于标记核酸适配子胶体金的制备及性能

为了获得适于标记寡核苷酸适配子的胶体金,对制备工艺条件进行了优化:20 mL 0.1 g/L氯金酸溶液中添加10 g/L柠檬酸三钠500 μL,pH=3.0,初始沸腾时间小于4 min,加入还原剂后反应时间为6 min.通过紫外可见光谱扫描和透射电镜对其性能进行鉴定,获得了分散均匀、直径15～20 nm的胶体金颗粒,可准确标记核酸适配子,且将胶体金标记的链霉素适配子与半抗原小分子链霉素进行反应,可对链霉素进行定性和半定量检测,满足利用胶体金标记适配子检测靶物质的需要.     

基于胶体金标记银增强的日本血吸虫免疫传感器

 提出一种高灵敏的、基于银增强放大和免疫胶体金技术压电石英晶体免疫传感器。采用夹心法模式,在电极表面固定日本血吸虫抗原,用以捕获血清中的日本血吸虫兔抗血吸虫抗体,再与胶体金标记的羊抗兔IgG二抗形成免疫复合物,加入银增强溶液,通过胶体金催化银离子还原,使大量银沉积在纳米金周围,提高压电石英晶体免疫传感器的灵敏度。结果表明,基于胶体金标记银增强的日本血吸虫压电石英晶体免疫传感器,对兔抗血吸虫抗体具有较高的识别能力,其操作简单、灵敏度高、线性范围宽、检测下限低。将该方法应用于兔血清中日本血吸虫抗体的测定,取得了满意结果。     

玉米精细胞质膜特异糖蛋白胶体金免疫定位

用亲和层析,SDS-PAGE及印迹技术,从玉米精细胞中分离纯化质膜蛋白。用ConA-HRP检测获得分子量为37和39kD两种糖蛋白特异成分。用它们分别免疫小鼠得到多克隆抗体,以兔抗鼠IgG胶体金(15nm)为探针,检查此两种蛋白在精细胞质膜上的分布。免疫定位表明,37kD, 39kD多肽是玉米精细胞质膜所特异的。有关此多肽的功能有待进一步研究。