一种改进的漆酶酶活检测方法

以 2 ,2′ -连氮 -双 (3-乙基苯并噻唑 - 6 -磺酸铵 ) (简称ABTS)为漆酶A、B的底物 ,采用UV - 2 2 0 1型紫外 -可见分光光度计连续记录酶反应在 2 5℃ ,4 2 0nm波长下的时间历程曲线 ,并求取最初部分的斜率以计算漆酶酶活的方法 .该方法直观、方便、准确且可靠 .在 2 5℃的 0 .0 4mol/LBritton Robinson缓冲溶液中 ,漆酶A、B的最适 pH值分别为 4 .0和 4 .5 .在 2 5℃最适 pH值的Britton Robinson缓冲液中 ,由双倒数作图法求得漆酶A、B的米氏常数Km 分别是 6 .6 4× 1 0 - 5mol/L和 2 .2 1× 1 0 - 5mol/L ,漆酶A、B的最大米氏反应速度Vmax分别是 1 4 2 5μmol.M (L·min)和 32 5μmol.M (L·min) .漆酶A、B的酶活分别为 2 2 99μmol·min- 1·L- 1和 1 1 4 8μmol·min- 1·L- 1.     

褐飞虱NADH泛醌氧化还原酶51kDa亚基cDNA片段的克隆及表达分析

NADH泛醌氧化还原酶是动物体内呼吸链电子传递系统的第一个酶，克隆水稻害虫褐飞虱的NADH泛醌氧化还原酶基因，及研究其在褐飞虱与水稻互作中的表达变化，将为科学防治褐飞虱提供新的线索。利用反转录多聚酶链式反应（RT-PCR）技术克隆了褐飞虱NADH泛醌氧化还原酶51kDa亚基基因的cDNA片段，并进行了序列测定；使用NoRhem杂交技术检测了该基因对两种不同抗性水稻的分子反应。分子杂交结果表明，在取食抗性水稻品种B5后，褐飞虱的NADH泛醌氧化还原酶51kDa亚基基因表达水平明显升高，而取食感虫水稻TN1后，该基因的表达水平没有明显变化。     

浸矿细菌中硫化氢-三价铁氧化还原酶的纯化

利用Fe3 作为元素硫的电子受体,由铁生长的T.f硫化氢-三价铁氧化还原酶纯化至电泳匀质状态,对主要浸矿细菌氧化亚铁硫杆菌(T.f-dx)中的硫氧化酶关键酶进行分离与纯化.用质谱仪测定硫氧化酶的相对分子质量为46 072.06(精确度为土0.01%);SDS-PAGE(电泳)结果表明硫氧化酶由2个相同的亚基组成.在硫氧化过程中硫氧化酶绝对依赖于还原型谷胱苷肽(GSH),该酶的等电点和最适pH值分别为4.6和6.5.     

高产木糖醇酵母菌的筛选鉴定及两级法发酵特性

从300多种土壤样品中进行筛选,最终得到10株可耐受300 g/L木糖的酵母菌株,且其木糖醇转化率超过64.0%.其中酵母菌株SB18在150 g/L木糖下的木糖醇转化率为68.5%,为相同条件下转化率最大的菌株,并经18SrDNA测序鉴定为热带假丝酵母.酶活测定结果显示SB18木糖还原酶主要依赖辅因子还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH),其酶活性远大于木糖醇脱氢酶活性.对SB18进行两级法发酵条件研究,确定补充氮源为尿素和酵母提取物,接种量为0.5 g/L,转速转换时间为36 h.在此条件下由250 g/L木糖摇瓶发酵252 h得到207.65 g/L木糖醇,转化率为83.1%,达到理论值的91.8%.本研究表明酵母菌SB18在高浓度木糖醇的工业生产中具有很大的应用潜力.     

人类肽-甲硫氨酸亚砜还原酶的cDNA克隆、组织表达谱特征及染色体定位

蛋白质结构中某些氨基酸的氧化和还原是生物体内对蛋白功能的一种调控方式．甲硫氨酸（Ｍｅｔ）被氧化则变为甲硫氨酸亚砜（Ｍｅｔ（Ｏ））,它可导致所在蛋白质的生物学活性降低或丧失,但肽－甲硫氨酸亚砚还原酶（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ, ｍｓｒＡ）则可使甲硫氨酸亚砜还原为甲硫氨酸,使其所在蛋白质重新恢复活性．为了研究人体中Ｍｅｔ氧化还原的机制,以牛ｍｓｒＡ ｃＤＮＡ序列为信息探针,筛选人ＥＳＴ数据库,依据若干同源ＥＳＴ的信息从人ｃＤＮＡ分子库中克隆到一个长１２５５ｈｐ的人ＭＳＲＡ ｃＤＮＡ．该ＣＤＮＡ包含一个长７０５ ｂｐ的可读框,它编码了 ２３５个氨基酸残基．同源性比较表明,该基因与牛和大肠杆菌的ｍｓｒＡ基因的氨基酸一致性分别为８８％和６１％．表达谱分析发现,该基因在人体大多数组织中均有一条长约１．６ｋｂ的转录本,并在肾中呈高表达．应用辐射杂种细胞株定位系统（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｈｙｂｒｉｄ ｍａｐｐｉｎｇ ｐａｎｅｌ, ＲＨ ｍａｐｐｉｎｇ）将该基因精确定位在人染色体８ｐ２２～２３区带的ＤＳＳ５１８和Ｄ８５５５０位标之间,由于此前已有Ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃｗｉｎｔｅｒｅｒｙｔｈ     

不同耐肥性的小麦品种幼苗硝酸还原酶、过氧化物酶活力及同功酶的研究

在不同耐肥性的6个小麦品种幼苗中,硝酸还原酶(NR)活力差异显著,耐肥性弱的品种NR活力高,活力是负相关关系。过氧化物酶活力,耐肥性强的高于耐肥性弱的。根据聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出的过氧化物酶的同工酶谱,耐肥性强的品种均有8条酶带,且着色深,耐肥性弱的品种则有7条,着色较浅。此外通过根系活力测定,耐肥性强的低于耐肥性弱的品种,而叶绿素含量则高于耐肥性弱的品种。     

Cloning and expressional analyses of a cinnamoyl CoA reductase cDNA from rice seedlings

Cinnamoyl CoA reductase (CCR: EC 1.2.1.44),the entry-point enzyme of the llgnin specific biosynthetic pathway, catalyzes the conversion of cinnamoyl CoA esters to their corresponding dnnamaldehydes. Multiple sequence alignment showed that the deduced polypeptide shared 70% similarity and 30% sequence identity at the amino acid level with defined CCR genes from other plant species and they all contain the common signature sequences thought to be the catalytic site as well as the putative NADP binding domain.Using a conserved OsCCR cDNA fragment as the probe for library screening, we isolated the genomic DNA that covered the whole coding region of OsCCR with total length of 3045bp including 4 introns and 5 exons. The open reading frame for our OsCCR gene coBtAin~ 337 amino adds. Northern blot indicated that OsCCR was expressed in different organs with the highest level found in stems. In situ hybridization results showed that OsCCR mRNA was localized mainly along the vascular bundles in stems and leaves, and also in lateral roots that was differentiating from the tiilering node. We conclude that the vascular-localized expression of OsCCR gene may suggest its possible involvement in llgnin biosynthesis. Cloning and characterization of OsCCR will help to clarify how llgniflcations in plants are regulated and will provide a physical basis for creating genetically engineered rice plants with optimal lignin contents.     

快速测定氧化还原酶活力的一次性介体电极

以葡萄糖氧化酶（GOD）为模型酶，用一次性丝网印刷电极检测氧化还原酶活力，选用具有较低氧化还原电位的单羟基二茂铁（HMF）作为电子传递介体，以电流法测定氧化酶的活力，所需时间仅为60s，线性响应范围为0～40U/mL，将电极用于检测黑曲酶发酵产生的葡萄糖氧化酶 （GOD）的活力，测定结果与传统的方法相对照，具有较好的一致性，相关系数为0.9813。     

三七总皂苷对碘酸钠所致视网膜损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨三七总皂苷(PNS)对碘酸钠所致视网膜损伤的保护作用及作用机制。方法 75只C57BL/6雄性小鼠，分为正常组、模型组和PNS低(50 mg·kg^-1)、中(100 mg·kg^-1)、高剂量(200 mg·kg^-1)组，每组15只。PNS治疗组小鼠按相应的剂量预保护7 d后，模型组和PNS治疗组小鼠以25 mg·kg^-1剂量尾静脉注射碘酸钠溶液，建立小鼠视网膜损伤模型。PNS治疗组继续灌胃给药28 d。采用眼底照相及OCT检测小鼠视网膜损伤情况；FFA法观察视网膜血管渗漏情况；HE染色观察小鼠视网膜组织形态变化；试剂盒检测血清中抗氧化指标水平，ELISA法检测小鼠血清中炎性细胞因子的表达水平；Western blot法检测各组小鼠视网膜组织细胞核内Nrf2、核内NF-κB p65、HO-1与NQO1蛋白的表达情况。结果 与正常组比较，模型组小鼠视网膜出现大量的黄白色类似玻璃膜疣状沉积，视网膜相对厚度下降(P<0.01),视网膜血管出现大面积的渗漏；血清中SOD活力与GSH含量下降(P...     

发酵液中Monacolin K的高效液相色谱分析方法研究

对高效液相色谱(HPLC)测定发酵液中Monacolin　K的含量进行了研究，找到了最佳流动相配比和流速等条件。通过测定其重视性、回收率等项指标，证明此方法对有效物质的检测具有准确、快速的特点。