HEp-2细胞MPM-2磷蛋白的蛋白质组学分析

MPM-2磷蛋白家族成员在有丝分裂进程中起着重要作用．为了从MPM-2磷蛋白家族层面入手研究细胞周期调控中磷蛋白的重要作用，以人上皮样喉癌细胞株HEp-2为细胞模型，运用双向电泳、免疫印迹以及质谱技术等蛋白质组学的方法对其细胞抽提物中的部分MPM-2磷蛋白进行了分析鉴定，初步确定了乙二醛酶(GlyoxalaseⅠ)、真核翻译起始因子(eIF4B)以及核质蛋白NPM等MPM-2特异识别的细胞磷蛋白，这将有助于进一步研究MPM2磷蛋白家族成员在细胞周期调控中的重要作用．     

Studies of a key protein in the mechanism of the excitation-contraction coupling process of frog skeletal muscle,using phenylglyoxal

The excitation-contraction (E-C) coupling process in single twitch fibres from frog toe muscle was inhibited selectively by phenylglyoxal (PGO), a specific guanidyl modifying reagent. A new protein (31.5 kDa), which has PGO-binding ability and seems to play a key role in the E-C coupling process, was solubilized from transverse tubule membrane-junctional sarcoplasmic reticulum complexes (TTM-JSR) of frog skeletal muscles, using¹⁴C-PGO. The monoclonal antibody against this protein applied extracellularly inhibited the E-C coupling process of the single fibres. This protein appears to constitute the very first step of input for E-C coupling. It is considered to behave as an indispensable part of an electrometer to measure membrane potentials. Therefore, the name electrometrin is suggested for the new protein.     

抑制羧肽酶A催化活性的单克隆抗体的制备及性质测定

以羧肽酶Ａ为抗原，经动物免疫、细胞融合、筛选及３次克隆化培养，获得了一株稳定分泌对羧肽酶Ａ肽酶活性有抑制作用的单克隆抗体的杂交瘤细胞株１Ｇ１０。染色体数目为８０～９０；ＥＬＩＳＡ测定腹水效价为１０６；亲和常数为１．５９×１０９（ｍｏｌ／Ｌ）－１；免疫球蛋白属ＩｇＧ１型；分子量为１５０Ｋｄ。羧肽酶Ａ与该抗体反应后测定肽酶活性，显示出该抗体能抑制羧肽酶Ａ的肽酶活性，Ｄｉｘｏｎ法作图表明类似竞争性抑制反应，测得其表观抑制常数为１．１７×１０－７ｍｏｌ／Ｌ。该抗体可能针对羧肽酶Ａ的活性中心部位，为制备具有抗原内影像作用的抗独特型抗体酶打下了基础     

抗人尿激酶单克隆抗体的制备

采用常规免疫和脾内免疫相结合的方法，利用杂交瘤技术得到两个能分泌抗人尿激酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株１０Ｈ１０，１０Ｄ１２。它们分泌的单克隆抗体主要识别Ｍｒ．５４，０００的高分子量尿激酶和Ｍｒ．１８，０００的尿激酶Ａ链。两种单克隆抗体与胰蛋白酶，胰蛋白酶原，胰凝乳蛋白酶和胰凝乳蛋白酶原等丝氨酸蛋白酶和酶原无交叉反应。     

脊髓灰质炎病毒I型单克隆抗体的制备

目的: 为建立脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体．方法:以Vero细胞增殖病毒并用蔗糖密度梯度离心法纯化后,用病毒免疫SPF级Balb/c小鼠．取小鼠免疫脾淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接 ELISA 法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞,并用有限稀释法克隆化．用细胞培养法制备脊灰病毒单抗,并以中和试验测定单抗效价．结果:获得了8株分泌抗脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株G8G7能够稳定分泌抗体．间接ELISA 法测得单抗的效价为1∶8,中和试验测得中和抗体的效价为1∶58．结论:G8G7分泌的抗体为抗脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体.     

Preparation of monoclonal antibody based indirect competitive ELISA for detecting 19-nortestosterone residue

19-Nortestosterone (NT) has been illegally used in horse racing to boost physical performance, and in animal husbandry to accelerate weight gain. To monitor the abuse of NT, our goal was to develop a commercial enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kit. For this purpose, hybridomas were prepared by fusing NS0 mouse myeloma cells with splenocytes isolated from immunized BALB/c mouse. Noncompetitive and competitive indirect ELISA were used to screen positive cell clones. To optimize the indirect competiti...     

抗迟缓爱德华氏菌单克隆抗体制备及初步鉴定

用灭活迟缓爱德华氏菌菌株AL60306NA1免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗迟缓爱德华氏菌的McAb,获得3株可持续分泌抗迟缓爱德华氏菌McAb的杂交瘤细胞株3A7、4F11和4C9;腹水效价分别达到1.0×10-6、1.0×10-6和1.0×10-5;细胞亚型分别为IgG1、IgG2b、IgM.交叉反应结果...     

抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备研究

从影响融合率的2个主要因素探讨骨髓瘤细胞系Sp2/0细胞与黄曲霉毒素B_1免疫的脾细胞融合的最佳条件,使融合率达到100%.经筛选和克隆化,获得3株稳定分泌单克隆抗体的细胞株,分别命名为3B3、3H9、5G9.经过鉴定3株均为IgG_1亚类.其中3B3抗体与其他黄曲霉毒素几乎不发生交叉反应,腹水效价为1∶2×10~5,亲和力常数为3.1×10~7 L/mol,竞争性ELISA测出3B3抗体的最低反应浓度为0.05μg/L标准AFB_1样品的的回收率达96%.另外两株腹水抗体水平低,交叉反应强烈,腹水效价仅在1∶10~4数量级.     

天花粉蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的制备及鉴定

将小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0细胞）与经TCS免疫过的小鼠脾细胞融合,融合后的细胞悬浮于HAT培养液中进行选择性培养,挑选可以分泌TCS单克隆抗体的细胞系,再经克隆化为单克隆细胞系。用间接酶联免疫吸附法检测此细胞系分泌单克隆抗体情况。经细胞融合和2次克隆化后,获得1株可以稳定分泌TCS单克隆抗体杂交瘤细胞系,ELISA检测结果为阳性。获得了可以稳定分泌天花粉蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为TCS鉴定、应用奠定良好的基础。     

单克隆抗体连接表阿霉素导向治疗乳腺癌的体外基础研究

本文报道了抗人乳腺癌单克隆抗体Ｍ４Ｇ３与表阿霉素结合物的制备及其体外免疫活性．首先用高碘酸钠氧化葡聚糖，使其成为多醛基葡聚糖，并以此为中间载体将表阿霉素与单抗连接，经测定，每一抗体分子能携带３１个药物分子，且结合物仍具有良好的免疫活性，为单抗导向药物治疗乳腺癌提供了理论基础和实验依据．