荧光标记的叶酸修饰壳聚糖纳米载体研制

制备荧光标记的叶酸偶联壳聚糖纳米粒,为抗肿瘤药物给药系统提供载体材料。通过叶酸活性酯与壳聚糖上的氨基反应,使叶酸与壳聚糖偶联。将异硫氰基荧光素与叶酸偶联壳聚糖进行化学嫁接,以离子交联法制成具有荧光的叶酸偶联壳聚糖纳米粒,并与肝癌HepG2细胞进行体外细胞实验。实验结果表明:叶酸活性酯用量和反应温度及试剂滴加速度是影响偶联比的主要因素;在叶酸活性酯与壳聚糖用量质量比为1:1,反应温度为30℃,滴加速度为2mL/min,反应时间为12h的条件下可得到偶联稳定的叶酸偶联壳聚糖;所制得的纳米粒粒径为290nm,形态规则,细胞荧光效果明显;此方法能用于制备荧光标记的叶酸修饰壳聚糖纳米粒载体。     

Evidence for the induction and release of pancreatic folylpolyglutamate hydrolase by the ingestion of folyl polyglutamates in the rat

Pteroyl polyglutamate hydrolase (folyl conjugase), which hydrolyses the dietary polyglutamyl folates into simple forms prior to absorption, has been shown to be induced in rat pancreas in response to dietary polyglutamyl folates but not by ingestion of synthetic unconjugated folates. Folate absorption, as measured by the rise in serum folate levels after ingestion, of dietary conjugated folates is impaired in pancreatectomised animals whereas absorption of synthetic simple folate is not. A severe build-up of folyl conjugase is observed in the lumen of control but not in pancreatectomised animals after dietary folate ingestion. These results taken together would suggest that dietary folates are hydrolysed to monoglutamyl forms suitable for absorption in the lumen; the hydrolysis is catalysed by a luminal folyl conjugase of pancreatic origin induced by dietary conjugated folates.     

糖复合物的生物应用

糖类化合物是一类很重要的生物大分子,它在细胞膜表面通过形成各种复合物参与许多重要的生理活动。主要讨论了近几年糖类复合物在药物靶向传递及肿瘤成像/检测等方面的研究进展,综述了叶酸、寡糖等作为靶向基团的药物靶向传递体系,同时探讨了各种糖类复合物在细胞成像及生物检测方面的应用,指出了未来糖化学的发展前景。     

Novel oscillations in cell suspensions ofDictyostelium discoideum

Summary With a light-scattering technique, two novel rhythms were discovered in cell suspensions ofDictyostelium discoideum. One is a damped oscillation with a period of 2 to 2.5 min (at 23°C) induced by folate in EDTA-dissociated undifferentiated cells. The other is a sinusoidal oscillation with a period of about 12 min occasionally observed with late differentiated cells. Obviously, the repertoire of rhythms of this simple eukaryotic organism is larger than previously assumed.     

菠菜叶酸合成代谢途径基因鉴定及表达谱分析

从菠菜（Spinacia oleracea L.）基因组数据库中筛选鉴定了与菠菜叶酸合成转运,及与C1代谢相关的25个基因,并对其编码的蛋白做进化树和保守域分析,发现叶酸蛋白在进化上表现出保守型和复杂性。用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）分析了叶酸含量不同的菠菜的叶酸相关基因表达量,发现在转录水平上只有少数叶酸基因表达量与菠菜叶酸含量有关。     

叶酸修饰pH响应壳聚糖衍生物胶束的制备及性能表征

制备了叶酸（FA）、胆固醇琥珀酸单酯（CHS）共修饰的羟丙基壳聚糖衍生物（CHS-HPCHS-FA）,该衍生物在水中能够自组装形成粒径为200~400nm的胶束。研究了疏水片段CHS的取代度对胶束的临界胶束浓度、粒径、载药及释药性能的影响,分析了胶束pH响应控释药物的机理,结果表明,疏水片段取代度高的产物,其临界胶束浓度较低,形成的胶束粒径较小,载药效率较高。体外溶出结果显示,载药胶束在pH5.5条件下释药速率明显比pH7.4条件下更快,体现了pH响应控释药物的效果。体外细胞毒性实验结果表明,胶束的生物相容性较好,且叶酸修饰的载药胶束可增强肿瘤细胞的摄取,细胞毒性明显增大。     

叶酸受体在血液肿瘤细胞株的表达及叶酸-聚乙烯亚胺共聚物的制备

目的:研究叶酸受体(folate receptor,FR)在血液肿瘤细胞表达的特点,合成叶酸-聚乙烯亚胺(FA-PEI)聚合物,探讨其作为靶向性基因输送载体的可行性.方法:用实时荧光定量PCR(real time PCR)法检测α、β、γ3种FR在血液肿瘤细胞K562、K562/A02、U266细胞株上的表达;利用叶酸(FA)活性酯在微碱性条件下与聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)的支链氨基反应,合成FA-PEI共聚物;用葡聚糖凝胶柱G-25分离、纯化;用紫外分光光度计波长扫描法及氢核磁共振谱(~1H NMR)法验证交联是否成功.结果:α、β、γ3种FR在K562、K562/A02、U266 3种细胞株上均表达,其中,α-FR的表达占优势,较β-FR和γ-FR表达量高;紫外分光光度计扫描图谱在365 nm处出现叶酸的特征性吸收峰;核磁共振(~1H NMR)示:在2.5～3.2处出现PEI亚甲基质子的特征性化学位移,在6.5～9.0处出现叶酸芳香质子的特征性氢信号.结论:FR在K562、K562/A02、U266 3种细胞株上均有较高表达;FA-PEI偶联成功,为其作为血液肿瘤治疗中1种潜在的靶向性基因输送载体提供了依据.     

适于99mTc(CO)3标记的叶酸衍生物的合成

以叶酸为原料，采用蝶蛉叠氮化合物与谷氨酸甲酯反应生成单一的γ羰基偶联产物，在此基础上再合成一种适合于^99mTc?28CO)3标记的叶酸衍生物，并用^1HNMR,^13CNMR和MS对产物进行了分析研究．     

一种肿瘤与热双重靶向的异丙基丙烯酰胺胶束的制备、表征与体内应用

利用自由基随机共聚反应原理, 合成了P(FAAn-co-NIPA-co-AAm-co-ODA)聚合物, 该聚合物兼具温度响应性和叶酸介导肿瘤主动靶向能力, 并在水中自主装形成胶束. 通过紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱对聚合物的结构、胶束的临界相变温度(LCST)及水合粒径进行了考察, 并利用透射电子显微镜考察胶束的粒径及形貌. 胶束粒径为80 nm, LCST为43℃. MTT实验结果显示, 胶束载体对A549和Bel-7402肿瘤细胞基本无毒性. 装载近红外荧光探针(ICG-Der-01)的胶束在MDA-MB-231和HCT116荷瘤裸鼠体内的动态分布研究证实, 该胶束载体具有明显的叶酸靶向能力与热靶向能力.