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RNA抑制技术在神经干细胞研究中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
神经干细胞是在神经系统中发现的一种可以再生的细胞,不仅具有自我复制能力,还可以分化为神经元、星状胶质细胞和少突胶质细胞,对研究神经退行性疾病和神经系统的发育过程产生很大的影响,因而在国际上形成了一个研究热点,但其增殖、分化乃至迁移的机制仍有待解决,RNA抑制技术是目前流行的基因沉默法,利用导入小片段核酸进入细胞,对特定基因表达的翻译阶段进行抑制,从而观察基因对细胞的影响,该文在已获得分化相关基因的基础上,利用RNA干扰(RNAi)和反义RNA(antisense RNA)法检测几个基因对神经干细胞的影响。 相似文献
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RNAi是由双链RNA引起的基因沉默现象,它通过降解具有同源序列的mRNA起作用,特殊设计的siRNA能使目的基因发生特异性沉默.目前,获得siRNA已经非常方便,导入方式最常用的是微注射.RNAi技术有编码区RNAi和启动子区RNAi两大类,均可以产生类似基因敲除的功能。在家蚕功能基因的研究中已经使用了这种方法.随着RNAi技术的不断进步,RNAi可广泛地应用到功能基因组学,药物靶点筛选,疾病治疗等方面. 相似文献
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利用RNAi技术, 通过干扰秀丽线虫中的sod-3基因表达, 建立了因超氧化物歧化酶3(SOD3)表达缺失引起快速衰老的线虫模型,为sod-3 基因功能的研究以及相关疾病的基因治疗等提供动物模型. 相似文献
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RNA干扰(RNA in terference,RNA i)技术是抑制和逆转基因表达的新型生物学研究工具.论述了RNA i的作用机制及其在基因组学、基因治疗、药物探查等方面的应用情况.d sRNA在酶切作用下产生siRNA,后者与RNA诱导沉默复合物R ISC结合,共同降解靶mRNA,从而达到阻断特异基因表达的目的.该技术已对基因功能、基因治疗和药物筛选等方面的体外实验产生了深刻的影响,但由于存在一些尚未解决的问题,这项技术尚未进行大规模临床应用. 相似文献
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目的核干细胞因子(nucleostemin,NS)是维持干细胞和癌细胞增殖所必需的蛋白质,可能成为肿瘤基因治疗的潜在靶点.本文旨在构建靶向NS干扰载体p Genesil-1-NS,为后续实验奠定基础.方法基于已发布的NS mRNA序列(NM_206825),选取5'-AAGCCTA GGAAAGACCCAGG-3'(397-416)作为候选靶序列,按shRNA载体设计原则,设计合成两条互补DNA链,退火后插入载体,并以酶切和测序鉴定重组转化子.结果经酶切及测序鉴定证实合成序列正确插入载体.结论成功构建NS特异性干扰载体p Genesil-1-NS,可用于NS在肿瘤中的功能研究. 相似文献
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选择HPV16 阳性宫颈癌细胞和RNAi 技术,研究CALCA 基因甲基化与HPV16-E7 致癌蛋白表达的依存关系。构建慢病毒siRNA 重组表达载体,建立稳定表达HPV16-E7-siRNA 的RNAi 细胞模型。以SiHa 细胞和RNAi 细胞模型的基因组DNA 为对象,选择CALCA 基因启动子区富含CpG 岛屿的目标片段,使用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)筛查分析,研究RNAi 抑制HPV16-E 7 表达后,CALCA 基因甲基化状态的可逆性程度。选出CALCA 基因启动子区富含CpG 位点的目标片段,其大小为365 bp,含有19 个CpG 岛屿,发现其中13 个CpG 位点的胞嘧啶在SiHa 细胞基因组DNA 中发生了甲基化(13/19),而在表达HPV16-E7-siRNA 的RNAi 细胞模型中,所有CpG 位点的甲基化已发生逆转(0/19 位点)。本研究从细胞水平证明了宫颈癌细胞内的CALCA 基因启动子高甲基化对HPV16-E7 致癌蛋白表达有依赖性,为进一步研究E7 蛋白的作用及致癌机制奠定了重要的物质基础。 相似文献
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大鼠MrgC受体与人的MrgX1受体有相似特性,但至今尚无MrgC受体的拮抗剂,阻碍了对其功能的研究.将大鼠的背根神经节(DRG)进行体外培养,加入小分子片段RNA(siRNA)对MrgC受体进行干扰.干扰时间为4 h,24 h之后再重复干扰1次.结果显示干扰后DRG中MrgC受体的mRNA表达减少84%,表明该分子片段RNA能有效使MrgC受体基因"沉默". 相似文献