不同倍性(2×、3×、4×)鸭梨基因组DNA甲基化水平与模式分析

以鸭梨(Pyrus.bretschneideri Rehd.cv.‘Yali')多倍体(2×、3×、4×)为材料,应用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术研究不同倍性鸭梨基因组DNA甲基化水平及模式变化.共筛选22对引物,平均每对引物产生约50条带,统计100～500 bp的扩增带,共计954个位点.分析表明:鸭梨2×、3×、4×分别检测到831、886、852个位点,发生甲基化位点分别占15.5%、20.0%、16.8%,其中全甲基化占9.7%、11.9%、9.7%.分析这些位点甲基化模式表明:甲基化模式在三个倍性间类型相同的占所检测位点的69.2%,仅两种倍性相同的为25.4%,各不相同的占5.5%,其中三倍体41.4%甲基化位点发生改变,显示出独特的DNA甲基化特点.     

MSAP enhances migration of C6 glioma cells through phosphorylation of the myosin regulatory light chain

A key regulatory mechanism in cell motility is the control of myosin activity, which in non-muscle cells is determined by phosphorylation of the myosin regulatory light chain (MRLC). Here we show that MRLC-interacting protein (MIR)-interacting saposin-like protein (MSAP) enhances cell spreading in fibroblasts and migration of rat C6 glioma cells through increases in MRLC phosphorylation. Overexpression of MSAP enhanced the motility of glioma cells measured in matrigel invasion chambers and using a scratch assay. Downregulation of MSAP by RNA interference significantly decreased glioma cell migration and phosphorylation of MRLC. Inhibition of the corresponding MRLC kinase by ML-7 did not affect migration of MSAP-overexpressing cells. The present results show that MSAP controls glioma cell migration via enhancement of MRLC phosphorylation. This effect is independent of the activity of MRLC kinase. Thus, MSAP is a novel modulator of cell motility that influences migration of glioma cells and possibly other tumors.Received 9 February 2005; received after revision 2 March 2005; accepted 21 March 2005     

5-氮杂胞苷对小麦生长发育及DNA甲基化的影响

以小麦(Triticum aestivum L.)品种周98165为材料,对5-azaC处理前后的幼苗形态及生长指标进行了研究,并采用AFLP和MSAP技术对其遗传稳定性和DNA甲基化变化作了初步探讨.结果表明,一定浓度(5～50 μmol/ L)的5-azaC不仅能使小麦的分蘖能力有所提高,而且还影响抽穗和花期、千粒重等指标,100 μmol/ L以上的5-azaC对小麦根和苗的生长有显著的抑制效应.AFLP分析表明,不同浓度5-azaC处理之间未见明显差异片段,5-azaC处理过程中材料基因组碱基序列保持一致,未发生变异.运用MSAP技术分析了5-azaC处理前后样品的甲基化水平,与对照相比,5-azaC处理后的材料均产生了不同程度的甲基化变化,其中去甲基化条带占总变异带的60%以上.DNA去甲基化的程度随5-azaC剂量的增大而提高,且不同浓度处理引起的甲基化变化的模式基本一致.     

抗白粉病小麦近等基因系DNA甲基化的MSAP分析

应用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术检测小麦抗白粉病代换系6A／6V与感病品系京411的近等基因系NILs,及其亲本6A／6V和京411的基因组DNA甲基化变化．结果表明,NILs的整体甲基化水平（22．9％）略高于6A／6V（21．2％）,低于京411（23．4％）．分析其甲基化模式发现,NILs相对京411甲基化水平降低条带比例（2．89％）明显高于甲基化提高条带（0．55％）,而相对抗病亲本6A／6V,NILs甲基化水平降低条带比例（2．96％）明显低于甲基化提高条带（4．20％）,说明NILs的整体基因表达水平低于6A／6V,高于京411．     

高活力水稻种子萌发过程中DNA甲基化变化的MSAP分析

DNA甲基化是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式,是调节基因组功能的重要手段。本实验采用MSAP方法分析,旨在研究高活力水稻种子萌发过程中的甲基化与去甲基化变化的规律,为研究种子的老化机理和种子的长期保存提供依据。结果表明:水稻种子萌发过程中,同时发生了甲基化与去甲基化作用,且去甲基化作用先于甲基化作用发生。发生去甲基化可能与基因活化有关,发生甲基化可能与组织特异性有关。     

DNA甲基化敏感扩增多态性技术及其在作物遗传研究中的应用

DNA甲基化是表观遗传修饰的基本方式之一,在调控植物基因表达、抵御逆境胁迫、防御外源基因侵入等方面具有重要作用,随着对DNA甲基化研究的深入,在AFLP技术基础上衍生的DNA甲基化敏扩增多态性技术（MSAP）,以其高通量、高多态性、低成本、易操作等优点,在作物遗传育种研究的各个领域得到广泛应用。本文综述了该技术的基本原理与操作,及其在作物遗传研究中的应用现状。     

MSAP在水稻害虫白背飞虱中的应用研究

甲基化敏感的扩增多态性分析方法 (MSAP)是在扩增片段长度多态性技术基础上建立起来的主要用来检测样品基因组DNA甲基化情况的一种方法,特别适用于全基因组范围内检测CCGG位点的胞嘧啶甲基化情况,在高等动物和许多植物上已广泛应用,但尚未有在昆虫中应用该方法的报道。从DNA提取、酶切基因组DNA用量、酶切和接头连接时间、电泳图谱显影方法等方面对MSAP方法进行了改进,并在水稻重要害虫白背飞虱上得到成功应用。这为将来在其它昆虫中使用该方法研究基因组DNA甲基化情况提供了一定借鉴和指导价值。且通过比较白背飞虱雌雄性别间和长短翅型间的MSAP图谱,发现雌雄性别间和长短翅型间的基因组DNA甲基化式样都存在明显的差异,说明DNA甲基化可能参与了性别和翅型分化的调节。     

Patterns of DNA cytosine methylation between haploids and corresponding diploids in rice

In higher plant, about 30% cytosines are methy-lated[1], among which about 90% methylated sites lie in CpG dinucleotide and CpNpG trinucleotide[2]. The me-thylated DNA has inducing and epigenetic effects on cell biological procedures such as gene differen…     

Detection of DNA methylation changes during seed germination in rapeseed （Brassica napus）

DNA methylation is a common yet important modi- fication of DNA in eukaryotic organisms. DNA methy- lation, especially methylation of cytosine (m5C), have both epigenetic and mutagenic effects on various cellu- lar activities such as differential gene exp…