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1.
采用成分明确的体外培养系统产生牛体外受精胚胎,结合荧光免疫定位的方法,利用激光共聚焦成像系统研究了在牛卵母细胞及不同发育阶段早期胚胎中IGF-Ⅰ及其受体的表达.结果表明,IGF-Ⅰ及其受体从未成熟的卵母细胞、成熟的卵母细胞到早期胚胎发育的各个阶段均有表达,在COC的颗粒细胞中也有表达.IGF-I在成熟卵母细胞中主要定位于细胞膜附近,在未成熟卵母细胞、2细胞期胚胎中分布于细胞膜及膜下区域,在8细胞期胚胎和桑椹胚中分布于整个细胞质中,在囊胚阶段主要位于滋胚层,内细胞团细胞有少量的表达.IGF-IR在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及2细胞、8细胞期胚胎中集中分布于卵裂球远离胚胎中心的细胞膜上,在桑椹胚期时遍布于整个胚胎细胞的细胞质中,在囊胚期时主要分布在滋胚层,内细胞团细胞有少量表达. 相似文献
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根据绵羊毛囊角蛋白关联蛋白(KAP 6-1)基因已知DNA序列设计合成了两个特异性引物,以绵羊基因组DNA为模板,PCR扩增出1 042 bp的特异性片段,连接到pM D 19T载体中获得该片段克隆.经过快速提质粒法筛选、限制性内切酶分析表明该克隆包含所需的目的片段.DNA测序结果也证明该克隆片段与原基因5′端调控区序列相比具有很高的一致性.研究结果为今后制备转基因克隆动物,在毛囊细胞中特异性表达绒毛生长调控基因奠定了基础. 相似文献
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山羊胚胎的体外发育及冷冻保存研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用体外培养的方法,对山羊2~8细胞胚进行培养以后将体外发育至囊胚的胚胎进行冷冻保存,以便探讨山羊早期胚的体外培养方法和冷冻方法对体外发育胚冷冻效果的影响。将胚胎分别放入M199、M199+输卵管上皮细胞和M199+输卵管上皮细胞+EGF的培养液中进行培养,选取发育至囊胚期的胚胎分别以甘油和乙二醇为冷冻保护剂进行冷冻保存。结果体外培养胚的囊胚发育率在三个处理组中分别为12.5%、70.6%和76.9%。使用M199处理组与添加输卵管上皮细胞、添加输卵管上皮细胞和EGF的处理组之间具有极显著性差异(P<0.01)。冷冻解冻胚的形态正常率和发育率在以甘油和乙二醇为防冻剂的处理组中分别为68.7、58.3%和78.6%、72.8%。两组之间无明显差异,结果表明,采用与输卵管上皮细胞共同培养的方法能够提高山羊胚胎体外培养的发育率,以甘油和乙二醇为冷冻防冻剂均适合于山羊体外发育胚的冷冻保存,两者相比乙二醇的效果略优于甘油。 相似文献
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许多研究者报道了某些非极性表面活性剂在防止蛋白质低温冷冻变性方面有着明显的效果.本研究就某些非极性表面活性剂对胚胎的防冻作用作了初步探索.方法是分别将不同浓度的两种表面活性剂Polysten20(P20)和SY-glysterML-750(ML750)添加于改进的磷酸缓冲液(PB1)和本研究采用的防冻液(FS:PB1+3mol乙烯二醇+0.25mol乳糖)中,处理小鼠早期胚20min后培养并观察对胚胎发育的影响,以确定它们对胚胎的临界安全浓度(CSC).在PB1中,两种表面活性剂的CSC值均为0.5%,而在FS中,则为0.05%.然后将两种表面活性剂P20和ML750分别以0.05%和0.03%两种浓度添加于FS中,以FS作为对照组.在室温下平衡处理小鼠桑椹胚和早期囊胚5min后连同防冻液一起装入塑料冷冻细管中.在液氮蒸气(-170℃)中预冷冻1min后即投入液氮内保存.在38℃水浴中快速解冻并去除防冻剂后在Whitten培养液中培养24h.分别观察和统计冷冻-解冻胚的形态正常率和发育率.结果表明:处理组与对照组在冷冻-解冻胚形态正常率方面无显著差异(P>0.05),而添加0.03%P_2O或ML750的两 相似文献
5.
通过PCR方法扩增了人胰岛素(HI)基因1.34kb的DNA片段并克隆于pUC18的SmaⅠ位点内。经DNA序列分析表明,该片段为HI基因的氨基酸编码区及3'端调控区序列。同时,应用PCR方法对牛α-乳白蛋白(BαLA)基因进行了扩增,得到了0.84kbDNA扩增片段。将其克隆于去除了EcoRI位点的pUC18SmaI位点内,经内切酶分析和DNA测序证明该片段是BαLA基因5'调控区序列。EcoR 相似文献
6.
为了探明血管内皮生长因子VEGF对牛体外受精胚胎早期发育的影响,本试验采用了成分明确的体外发育培养系统.通过在体外发育培养液中分别添加0、1、5、10 ng/mL的VEGF,对868枚胚胎的发育能力进行检测.研究结果显示:对照组与添加1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL VEGF的各实验组卵裂率分别为61.99%、75.69%、76.81%、68.92%;8-细胞期发育率分别为51.82%、61.21%、65.41%、63.40%;囊胚期发育率分别为27.74%、24.85%、23.90%、22.88%;囊胚孵化率分别为5.11%、4.85%、5.66%、3.27%.添加1、5、10 ng/mLVEGF与对照组比较,卵裂率、8-细胞期发育率有所增加,囊胚期发育率和囊胚孵化率表现下降趋势,但实验组与对照组间上述几项发育指标差异均不显著(P>0.05). 相似文献
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绒山羊曲细精管生殖细胞的长期培养和精子发生过程的观察 总被引:10,自引:0,他引:10
哺乳动物精子发生过程是生殖生物学的重要研究课题之一.为了开展对山羊精子发生过程的研究,我们首次建立了绒山羊睾丸生殖细胞原代培养方法.原代生殖细胞和支持细胞(Sertolicells)由绒山羊睾丸曲细精管组织块产生,在体外共培养超过三个月.在共培养期间,观察到绒山羊的精原干细胞分化为精母细胞和精子细胞的形态变化过程.这一方法的建立为山羊精子发生过程的研究和应用打下了基础.实验结果显示,在没有添加任何生长因子的条件下,绒山羊睾丸生殖细胞长期增生分化,不断产生精子细胞.这一结果暗示了组织块和共生的支持细胞为生殖细胞的增生和分化提供了营养因子和调节因子.生成的游离精子细胞最后全部死亡,暗示这一共培养体系不能提供变态过程所需因子. 相似文献
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牛体外受精胚胎移植的应用研究 总被引:4,自引:0,他引:4
探讨了利用牛IVF技术,在国外生产纯种肉牛胚胎运用国内进行大批量移植后受体母牛的妊娠率及产犊情况,共移植受体母牛158头,妊娠率(90d)为21.4% ̄48.5%,共计产纯种犊牛55头,5 ̄8日龄胚移植给发情第7d的母牛能够得到较高的妊娠率(43.8% ̄50.0%),受体母牛在前两交伯移植妊娠率(30.0% ̄35.0%),明显高于第三次(15.4%)以后的妊娠高,研究结果证实,在国外生产的的占IV 相似文献
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体外培养绵羊卵母细胞核质成熟的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
实验通过研究卵母细胞的核相及皮层颗粒的分布,探讨按照卵泡大小和卵丘细胞层多少分类后的不同绵羊卵母细胞在体外培养过程中的核质成熟情况,结果表明:(1)小卵泡卵经体外24h后的核质成熟率分别为45.9%和28.2%,远低于大(93.5%,66.7%)、中(85.1%,51.0%)两类卵泡卵,2)大卵泡卵在体外培养20h已完成核质成熟,较中等卵泡提前4h。3)gkphe 3nfc c h gcft pn 相似文献
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牛体外受精胚胎在成份确定培养液内的发育 总被引:1,自引:1,他引:1
将牛体外受精胚胎培养于化学成份确定的 SOF+PVA的培养系统内 ,观察了不同PVA浓度对胚胎体外发育的影响 .结果在 1 mg/ml、3mg/ml和 5mg/ml的 PVA浓度条件下 ,囊胚的发育率分别为 2 7.5% a、1 9.1 % a和 4 .3% b( a>b,P<0 .0 1 ) .将体外受精胚胎分别培养于 M1 99+输卵管上皮细胞、SOF+BSA和 SOF+PVA的三种培养系统内 ,囊胚的发育率分别为 2 0 .4 %、2 9.0 %和 2 7.5% ,结果表明本研究确立的化学成份确定的体外培养系统可以用于牛体外受精胚胎的发育培养 . 相似文献