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从流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)Rd 株中纯化了限制性内切核酸酶HindⅢ及部份纯化了Hind Ⅱ;探讨了纯化过程中的某些问题;检查了酶对底物双链DNA 的特异性内切作用,从琼脂糖平板凝胶电泳中观察到的经消化后产生的DNA 断片表明:酶对各种底物具有专一性作用;通过DNA 断片的重新连接证明:经Hind Ⅲ消化后生成的断片具有粘性末端,也说明纯化的Hind Ⅲ中不合明显的外切酶活力;用聚丙烯酰胺-十二烷基硫酸钠平板凝胶电泳,葡聚糖凝胶G150分子筛层析及蔗糖密度梯度离心法测定了Hind Ⅲ的分子量并对其亚单位进行了讨论. 相似文献
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本文以质粒pBR322及噬菌体λcI857S7DNA 为底物研究了Mn~(++)及DMSO 对限制酶Hind Ⅲ对底物DNA 识别顺序的影响.在10mMTris-HClpH8.4,10mM MgCl_2,60mMNaCl 及7mM 巯基乙醇的正常反应条件下,HindⅢ在pBR322DNA 上只有一个切点,酶切后在凝胶电泳上可看到一条带.用10mM Mn~(++)代替Mg~(++)或在反应液中加入DMSO 进行酶切,在电泳上出现许多新的带.以λcI857S7DNA 为底物也得到类似的结果.新产生的片段可以用DNA 连接酶重新连接成线状分子.Mn~(++)及DMSO还能使Hind Ⅲ切割细菌本身的DNA.这些数据表明:Mn~(++)及DMSO 确实能降低Hind Ⅲ对底物的专一性,放松对识别顺序的要求.讨论了专一性降低的机制及其在核酸研究及基因工程中的意义。 相似文献
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