固定化细胞催化水解苄青霉素的动力学及其工艺分析

本文运用初速度法、诊断变量法和非线性数值最优化方法对明胶、戊二醛固定化含青霉素酰胺酶大肠杆菌细胞水解苄青霉素的反应进行动力学模型检验和参数估计。测定了苄青霉素、6APA和苯乙酸在固定化细胞内的扩散系数。建立包括扩散和反应的总动力学模型。在多变量条件下用电子计算机求解有效因子、进行模拟试验,获得设计固定化细胞和确定最佳工艺的有用信息。对研究过程中涉及的开放体系酶反应动力学和易降解物质的扩散方程等问题进行理论分析和实验验证。     

5′-磷酸吡哆醛高分子衍生物的辅酶功效

5′-磷酸吡哆醛(PLP)与经β-硫酸酯乙砜基苯胺活化的聚乙二醇(PEG)或右旋糖酐(Dx)共价结合,得可溶性5′-磷酸吡哆醛衍生物。用PLP-PEG和PLP-Dx衍生物代替PLP作为谷氨酸脱羧酶的辅酶,谷氨酸脱羧酶活力回复率达18%左右;用甘氨酸封闭的PLP-PEG代替PLP作为辅酶,谷氨酸脱羧酶活力回复率达44%。     

青霉素酰化酶研究——Ⅱ.酶的修饰和修饰酶的性质

本文介绍用β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)活化右旋糖酐T2000以修饰大肠杆菌5852青霉素酰化酶。活化时500mg右旋糖酐需SESA 20mg。制备对氨基苯磺酰乙基葡聚糖(ABSE)-右旋糖酐的反应温度为80℃,与500mg活化右旋糖酐偶联的酰化酶酶量为100u,修饰率达88.3%。用琼脂糖(Sepharose 4B)或交联葡聚糖(Sephadex G150)柱层析分离得高分子量的修饰酶。修饰酶对热和pH的稳定性均优于自由酶,最适温度提高,但最适pH和高浓度青霉素G底物抑制现象没有改变。     

青霉素酰化酶研究——Ⅰ.抑制作用,纯化和性质

丙酮、乙醇和苯丙氨酸是大肠杆菌青霉素酰化酶的竞争性抑制剂,分别抑制模拟底物3-苯乙酰胺基6-硝基苯甲酸水解的活力。青霉素酰化酶粗酶液经硫酸铵盐析,pH5沉淀,SE-Sephadex C50层析,苯丙氨酸-Sepharose 4B疏水层析和DEAE-Sephadex A25层析可得纯酶,聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳呈现一条带,比活为27.5u/mg蛋白。纯化总活力回收率为28.1%。青霉素酰化酶分子量约为90000,有两个亚基,分子量分别为70000和20000,其最适温度为40℃,最适pH为8.0,催化青霉素G水解的米氏常数为2.94mmol/L。     

固定化青霉素酰化酶动力学参数测定

本文介绍一种测定固定化酶催化反应动力学参数的新方法。在纤维间扩散阻力和外扩散阻力存在下,改变底物输送流速,测定纤维状固定化酶的一系列对应反应初速度;用双倒数图和Dixon图分别求各种流速下的表观米氏常数(K_m~(?))和表观产物抑制常数,再用所求得的各种表观动力学参数与对应的底物输入酶柱的线速度倒数的线性关系式,两次图解求得本征动力学参数。采用这一方法求得纤维状固定化青霉素酰化酶催化重排酸水解的本征米氏常数(K_m)、产物7-ADCA和苯乙酸抑制常数的本征值(K_p,K_q)分别为6.9,16.8和94.4mmol/L。     

修饰超氧化物歧化酶的制备、性质及代谢

右旋糖酐用高碘酸钠氧化或溴化氰活化后,与SOD共价结合制得Dx(IO_4)-SOD和Dx(CN)-SOD(Ⅰ)。它们的活力保存分别为81%和70%。在抗热、抗酸碱和抗蛋白水解酶等能力均比天然SOD高。静脉注射天然SOD和Ⅰ,在小白鼠血浆中的半衰期分别为4.06和41.46分钟,Ⅰ的半衰期明显提高,清除率大大下降。