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本报道对一个衰老下调基因的鉴定.从绿色和正在衰老的紫萍叶状体组织中分别提取总RNA,然后使用一个oligo—dT引物进行逆转录合成cDNA.cDNA用oligo—dT和简并引物进行PCR扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳.电泳后发现,一条cDNA带存在于由绿色组织而不存在于由正在衰老的组织所得到的样品中.将这一cDNA回收,克隆进T—vector并且进行了测序.Northern blot分析表明,该cDNA对应基因的表达受衰老调节而减少.根据第一个cDNA序列设计了一个特异性引物,进行RT-PCR扩增,并且克隆到另外一个部分cDNA.测序结果表明,第二个克隆具有与第一个cDNA相重叠的40bp的片段.将第一个cDNA序列与删去40bp重叠区的第二个cDNA序列连接,我们得到一个322个核苷酸的cDNA3'端部分序列.用BLASTN程序将该序列翻译后与NCBI non—redundant database中已知的蛋白进行比较,结果表明所克隆的cDNA代表的基因与光呼吸途径的丝氨酸-乙醛酸氨基转移酶编码基因有很高的相似性. 相似文献
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