利凡诺方法分离纯化犬血浆蛋白络合及解离条件探讨

目的 普通犬血浆和高免血清分别是白蛋白和特异性免疫球蛋白分离纯化的原材料,针对不同的血浆确立相应的络合条件和解离条件,以分离纯化白蛋白和丙种球蛋白.方法 血浆按1∶1体积加入利凡诺溶液,用2％Na2CO3调pH值,使犬血浆与利凡诺进行充分络合;上清液两次络合后解离,获得丙种球蛋白;沉淀解离获得白蛋白.分别对上清液、两次解离液进行蛋白浓度、纯度的测定.结果 确定pH 8.5,室温络合2h,利凡诺浓度在2.3％时为白蛋白的最佳络合条件;pH6.0,室温络合2h,利凡诺浓度2.3％为丙种球蛋白最佳络合条件.0.6％氯化钠,0.25％辛酸钠,pH 1.37为白蛋白解离最佳条件;0.85％氯化钠,1.3％甘氨酸,pH6.8为丙种球蛋白的最佳解离条件.结论 利用利凡诺方法,可以成功分离和纯化犬白蛋白和丙种球蛋白.     

犬瘟热病毒N蛋白抗原表位基因的合成和杆状病毒表达载体的构建

目的串联合成犬瘟热病毒N蛋白抗原表位基因,并构建其杆状病毒表达载体。方法利用生物信息学软件,预测N蛋白的抗原表位,串联合成这些抗原表位。利用定向克隆的方法,将该基因片段连接到杆状病毒表达载体pFastBac-Hta。结果获得了包含犬瘟热病毒N蛋白抗原表位的基因,并成功构建pFastBac-N合成表达载体。结论该实验为犬瘟热病毒N蛋白抗原表位基因在杆状病毒内的表达奠定了基础。