2株甲型肝炎病毒(L8 株、H2株)蛋白酶2A在大肠杆菌中的表达

首次把生长特性有显著差异的 2株甲型肝病毒 (L8株、H2 株 )的蛋白酶 2A基因分别用基因工程技术克隆到大肠杆菌表达载体 pGEX -KG上 ,重组质粒转化至大肠杆菌 (E .coliBL - 2 1和DH5α)中 ,表达的结果显示 :2株甲型肝病毒的蛋白酶 2A均得以表达 ;表达量占菌体总蛋白 2 0 %以上 .为进一步纯化该蛋白酶、研究其生物学功能和与真核细胞代谢的关系奠定了基础 .     

人胚肺二倍体细胞株KMB17在培养过程中的自然凋亡

用延长培养周期方法诱导人二倍体胚肺细胞株ＫＭＢ１７自然凋亡,经光学显微镜、荧光显微镜、细胞流式仪、电子显微镜,证明ＫＭＢ１７细胞出现典型的凋亡特征：细胞圆缩、细胞核浓缩破裂、核染色质凝缩后分布于核膜边缘呈新月状和典型的凋亡峰．研究表明人胚肺二倍体细胞（ＫＭＢ１７）在培养过程中易出现自然凋亡．提示可望通过提高细胞对环境压力的耐受能力,预防或延缓细胞培养过程中的自然凋亡,提高操作单元细胞产品的生产效率．     

夹心ELISA检测新冠病毒及其抗原方法的建立和验证

研究制备了快速检测新冠病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）及其表面刺突糖蛋白受体结合域（receptor-binding domain,RBD）的ELISA试剂盒.该试剂盒由一对RBD单克隆抗体作为捕获抗体与检测抗体，其中检测抗体进行辣根过氧化物酶（HRP）偶联，通过方阵滴定法确定双抗夹心ELISA的最适工作条件.另外，对检测试剂盒进行线性、特异性、准确度、精密度等进行了验证.结果表明，双抗夹心ELISA方法中捕获抗体和酶标检测抗体的效价分别为1∶160 000和1∶320 000，试剂盒的定量检测下限为31 ng/mL.经验证，组装的试剂盒精密度为0.71%～1.59%，平均准确度为96.53%，与其他的同种属灭活病毒无交叉反应.试剂盒各项参数均符合《中国药典》（三部）2020版标准，表明该试剂盒适用于新冠病毒以及RBD抗原的快速检测.     

冻干甲型肝炎灭活疫苗免疫原性与安全性研究

研究冻干甲型肝炎灭活疫苗免疫原性、安全性及热稳性 .分别将冻干及液体甲型肝炎灭活疫苗注射小白鼠和恒河猴 ,确定小白鼠 7d存活情况及恒河猴的谷丙转胺酶 (ALT)水平、肝脏病理、抗 -HAVIgG水平 .用同等剂量 (12 80EL·UmL-1)的冻干灭活疫苗与液体灭活疫苗初次及加强免疫后 1周 ,2组猴在食欲、活动性、大便频率及持续时间方面均无异常 ;5 2周观察期内未出现肝脏病理改变及ALT水平异常升高 .冻干灭活疫苗与液体灭活疫苗诱发的抗 -HAV水平无显著差异 ,2组IgG水平均在免疫后第 12周达到初次免疫后的最高水平 ,冻干疫苗组为 12 0 47mIUmL-1,液体疫苗组为 11875mIUmL-1.两组无显著差异 (P >0 .0 5 ) .第 2 4周分别加强免疫同等剂量疫苗后 ,第 2 8周抗 -HAVIgG水平显著提高 ,达到最高水平 ,冻干疫苗组为 412 15mIUmL-1,液体疫苗组为 40 874mIUmL-1.冻干剂型的甲型肝炎灭活疫苗具有液体剂型同样良好的安全性和免疫原性 .     

2株甲型肝炎病毒蛋白酶2A核苷酸序列的测定与比较

从甲型肝炎病毒２个不同株感染的ＫＭＢ１７细胞中提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ特异性扩增出此２毒株病毒蛋白２Ａ基因,将２个２Ａ基因克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定,得到２个２Ａ基因的核心苷酸序列,序列比较发现它们及与ＨＡＶ野毒株相对应序列有突变存在,Ｈ２株与ＨＭ１７５相比有一个点突变,同源性为９９．７２％;与ＨＭ１７５比较,Ｈ２株和Ｌ８株第３１９７位核苷酸均由Ａ突变为Ｇ,相应的氨基酸由丝氨酸     

升高细胞外钙离子能抑制和促进细胞凋亡的发生

钙离子是细胞分裂,生长,死亡过程中重要的信号传导分子。为研究胞外钙离子与细胞凋亡的关系,将Ｃａ＾２＋（５￣７ｍｍｏｌ）加入无血清培养液观察钙离子对无血清诱导人胚肺二倍体细胞株ＫＭＢ１７凋亡的影响并将Ｃａ＾２＋（５￣７ｍｍｏｌ）加入含体积分数为２％血清的脊髓灰质炎病毒（ｐｏｌｉｏｖｉｒｉｕｓ）生长培养液中,研究胞外钙离子对ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ诱导凋亡的影响,经光学显微镜,荧光显微镜,细胞流式仪,电子