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Red/ET重组技术是近年来建立的一种基于高效率体内同源重组的新型遗传工程技术,该技术简便、快速.首先,通过一步融合的方法将链霉素抗性基因和氯霉素抗性基因同时克隆至pUC19上,从而构建出含有正反选择标记的载体pRC;其次,用安普霉素抗性基因或者氯霉素抗性基因替换了常用表达载体pET-28b上的卡那霉素抗性基因,改变了其抗性选择标记,得到的表达载体pMT和pCT可以更广泛地应用于不同宿主中;最后,还将启动和终止表达的区域定点插入pACYC184载体中,使其成为可以独立表达蛋白的表达载体p184.本研究所得到的载体为大肠杆菌宿主菌中的基因克隆和蛋白表达提供了基础. 相似文献
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以整合型质粒pSET152为出发质粒,建立并优化了变构菌素产生菌Streptomyces griseochromogenes(S.griseochromogenes)与Escherichia coli(E.coli)的属间接合转移体系,确定了适用于变构菌素产生菌灰产色链霉菌的最佳接合转移条件.研究发现Ca2+和甘氨酸都能够提高接合转移的效率,尤其是甘氨酸的效果非常显著.这一工作对于S.griseochromogenes的基因操作、小分子药物生物合成机制的研究以及具有自主知识产权的药物衍生物的开发具有普遍的应用价值. 相似文献
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