鲤鱼胶原蛋白的过敏原性研究

以鲤鱼鱼皮为研究对象,通过碱溶、酸溶、NaCl盐析等方法从鱼皮中分离纯化得到了胶原蛋白.SDS-PAGE分析显示,鲤鱼胶原蛋白由分子质量约为120 ku和115 ku的2条α链（α1与α2）、分子质量约为250 ku的β链以及大分子质量的γ链组成.分析比较鲤鱼胶原蛋白与鲢鱼小清蛋白的基本性质,结果显示：2种蛋白质的pH...     

太平洋牡蛎肌肉蛋白的模拟胃肠液消化研究

采用美国药典提供的模拟胃液、肠液配方,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Western blot),分析了太平洋牡蛎肌肉过敏蛋白和非过敏蛋白在体外模拟胃液、肠液消化稳定性的差异.结果表明:在模拟胃液中,非过敏蛋白均能被胃蛋白酶快速降解,而主要过敏蛋白原肌球蛋白在60 min时仍未被...     

鱼类肌肉中过敏蛋白的检测与分析

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)方法,分别对淡水鱼(鲤鱼、鲢鱼、鲫鱼)和海水鱼(黄鳍鲷、金鲳)等5种鱼肌肉,鳕鱼丸、鲢鱼丸两种鱼糜制品以及鲮鱼、沙丁鱼、鳗鱼3种鱼罐头中过敏原(小清蛋白)的含量进行了分析.结果显示,应用抗蛙小清蛋白单克隆抗体(PARV-19)可以分别在5种鱼白色肉和红色肉的肌浆蛋白中检测到特异性杂交条带,其分子量大小约为12～14.4 ku,且白色肉中的含量明显高于红色肉.但在5种鱼的肌原纤维蛋白、2种鱼糜制品和3种鱼罐头中,均未检测到小清蛋白.因此得到结论,无论是淡水鱼还是海水鱼,小清蛋白主要存在于白色肉肌浆蛋白中;经过加工的鱼制品中小清蛋白的含量有很大程度的降低.     

克氏原螯虾原肌球蛋白的纯化及过敏原性分析

以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western—blotting分析,确定克氏原螯虾主要过敏原为36ku蛋白质．通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质,以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白（Tropo-myosin,TM）多克隆抗体的Western—blotting分析,确定该蛋白质为TM．同源性分析表明,克氏原螯虾TM与南美白对虾TM、拟穴青蟹的氨基酸序列相似性较高（〉90％）．酶切位点预测显示,它分别有49个胰蛋白酶和6个胰凝乳蛋白酶的酶切位点．模拟胃肠液消化实验结果显示,纯化TM不易被胃蛋白酶降解,易于被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解,进一步的Western—blotting和抑制性ELISA分析结果显示,其消化产物仍具有一定的免疫活性．采用蒸煮处理可降低TM的消化稳定性及免疫活性,且蒸煮处理时间越长,效果越显著．说明。TM为克氏原螯虾主要过敏原．与其他甲壳娄动物TM的序列相似件较高．     

毒性与无毒性织纹螺肌肉蛋白的差异分析

通过SDS-PAGE分析毒性和无毒性织纹螺肌肉蛋白的电泳图谱差异,综合比较蛋白条带的迁移率及浓度,得出:毒性织纹螺肌浆蛋白的特征条带主要为23.6 ku和35.0 ku,无毒性织纹螺的特征条带主要为22.8 ku和31.2 ku;毒性织纹螺肌原纤维的特征条带主要为38.0 ku、50.8 ku和135.0 ku,无毒性织纹螺的特征条带主要为36.9 ku和125.8 ku.结合优化样品制备、等电点聚焦程序等条件,初步建立了织纹螺肌肉蛋白的双向电泳条件,并通过双向电泳分析了毒性和无毒性织纹螺肌肉中存在的差异蛋白.     

鲤鱼过敏原(胶原蛋白)的体外模拟消化

首先采用酸法提取纯化鲤鱼过敏原(胶原蛋白),依据美国药典提供的模拟胃液、肠液配方,分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对纯化的胶原蛋白进行酶解消化,以SDS-PAGE和免疫印迹分析测定纯化的胶原蛋白在体外模拟胃液、肠液中的消化稳定性及免疫原性.结果表明,鲤鱼胶原蛋白经模拟胃液(胃蛋白酶)消化15 min出现较为明显的降解,消化1 h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液(胰蛋白酶)消化30 min出现较为明显的降解,消化3 h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液(胰凝乳蛋白酶)消化1~4 h均未出现明显降解,其消化产物仍具有较强的免疫原性.结果提示,鲤鱼胶原蛋白的耐消化性及免疫原性可能是导致食物性过敏反应的重要原因.     

猪血激肽原的分离纯化及其对白鲢鱼鱼糜的凝胶作用

以猪血为原材料,通过硫酸铵盐析和柱层析等方法,分离纯化出2种半胱氨酸蛋白抑制剂激肽原（kininogen）.激肽原Ⅰ的得率为0.7 %,纯化倍数为613.7;激肽原Ⅱ的得率为24.1 %,纯化倍数为295.7.SDS-PAGE结果表明,激肽原Ⅰ和激肽原Ⅱ的分子质量分别为58 ku和116 ku.激肽原Ⅰ和激肽原Ⅱ对白鲢鱼（Hypophthalmichthys molitrix）鱼浆中肌原纤维蛋白降解都有一定的抑制作用,当激肽原Ⅱ添加量为鱼浆质量的0.03 %时,可以使鱼糜凝胶强度提高24 %.因此,激肽原可作为添加剂有效提高鱼糜制品的凝胶强度     

锯缘青蟹原肌球蛋白过敏者血清的筛选

为了解集美大学学生的饮食及食物过敏情况,对在校学生进行了问卷调查.调查共分发了4 000份,主要涉及水产品食物过敏的种类、过敏症状等.调查收到有效问卷3 890份,应答率为97.3%.自诉过敏的学生为1 149人,约占29.5%.对水产品食物过敏的有545人(占自诉过敏的47.4%),其中31例经ELISA检测,IgE为对蟹的原肌球蛋白呈阳性反应(占水产品食物过敏的5.7%,占蟹过敏的11.3%).男女之间无统计学差异.自诉对蟹、虾、贝、鱼等水产品的过敏症状相似,多为皮疹和皮肤瘙痒.调查结果表明,蟹、虾、贝类和鱼是主要的水产品过敏食物.食物过敏症患者血清食物过敏原特异性IgE升高明显,采用ELISA检测法,方便,安全,准确,对临床确诊与防治食物过敏症有重要意义.     

草鱼肌肉亮氨酸氨肽酶的分离纯化与性质研究

通过DEAE-Sephacel离子交换层析、Sephacryl S-200 HR凝胶过滤层析、羟基磷灰石层析和Phenyl Sepharose 6-Fast Flow疏水层析,从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉中分离纯化得到了一种亮氨酸氨肽酶,并对其生物化学性质进行了研究.结果表明,草鱼肌肉亮氨酸氨肽酶分子量约为105 ku,是单体结构.最适温度为40 ℃,最适pH为7.5,属于金属蛋白酶.除了Leu-MCA,该酶对其它多种荧光合成底物也有一定程度的分解作用,但对内肽酶对应的荧光底物则没有分解作用.     

4种海产贝类中主要呈味物质含量与季节变化的关系

以福建产鲜活杂色蛤（Ruditapes philippinarum）、缢蛏（Sinonovacula constricta）、褶牡蛎（Ostrea plicatula）和皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）为研究对象,每月分别检测其汤汁中的游离氨基酸、核苷酸、糖原含量,以探明这3种主要呈味物质的季节性变化规律。结果显示:4种贝类的呈味氨基酸含量在1—4月份较高,特别是2—3月份的质量含量均在2000 mg/kg以上,而6—8月份间的杂色蛤、皱纹盘鲍、褶牡蛎以及9月份的缢蛏的呈味氨基酸含量相对较低;在呈味核苷酸含量方面,4种贝类在1—4月份含量较高,特别是缢蛏和杂色蛤的含量均大于400 μg/g,而7—10月份的含量相对较低;同时,4种贝类的糖原含量也表现出相似的规律,在2—4月份较高,9—10月份则较低。可见,4种海洋贝类在呈味物质的含量上均表现出明显的冬春季节高于夏秋两季的规律。