影响麻疯树叶片离体再生条件的优化

为建立高效稳定的麻疯树离体再生体系,优化了诱导和分化培养基及培养条件.以无菌苗叶片为外植体,以MS为基本培养基,6-BA 2.0mg/L+2,4-D 0.02mg/L的激素组合对愈伤组织的诱导最有利,6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+GA30.1mg/L的激素组合对不定芽分化最有利.在此基础上针对外植体培养、愈伤组织继代的培养条件和继代次数3个因素进行优化.结果表明:采用麻疯树的无菌苗叶片为外植体,黑暗条件下诱导出愈伤组织,再在黑暗条件下继代一次后转入分化培养基中对不定芽诱导最为有利,分化率达72.59%.分化后得到的不定芽在含IBA 0.2mg/L的MS培养基上生根率达75%.生根苗在添加蛭石的含IBA 0.05mg/L的改良生根培养基中驯化培养后,再经过以蛭石∶腐殖土=1∶1(V/V)为培养基质的套袋培养,移栽后成活率达93%.     

金发草GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶基因的克隆及功能分析

通过RACE-PCR技术克隆得到金发草GMP基因的cDNA全长序列,命名为PpGMPase(GenBank序列号:KF586841).该基因开放阅读框长度为1086bp,编码361个氨基酸,分子式为C1787H2874N474O509S17;DNA序列由4个外显子和3个内含子组成;该基因与玉米、水稻、猕猴桃、烟草、拟南芥、番木薯等植物GMP基因具有较高的同源性,与二穗短柄草亲缘关系最近.采用荧光定量PCR方法对该基因响应非生物胁迫(盐、干旱和冷胁迫)的表达模式进行分析,结果表明:在高盐、干旱及低温胁迫后GMP基因的表达量都有显著性增加,并且其催化产物抗坏血酸含量也随之增加.