用加速热稳定试验筛选甲型肝炎减毒活疫苗热稳定保护剂

为筛选具有良好热稳定保护效果的甲肝减毒活疫苗（H2株）保护剂,利用正交设计和加速热稳定试验,将不同配比的保护剂和液体疫苗混合后,封入安瓿,分别置37度和45度,不同时间取样,检测其感染性滴度,结果表明无保护剂的对照疫苗在45度条件下感染性滴度仅能维持2D不变,第3天开始下降,至4天已下降1．27logCCID50.mL^-1,而有保护剂的5批疫苗在45度条件下感染性滴度能维持5天无显著变化,在37度条件下无保护剂的对照疫苗感染性滴度仅能维持7天无显著变化,10天显著变化,下降1．0－1．1logCCID50.mL^-1,而有保护剂的5批疫苗在37度条件下感染性滴度能维持10天无显著变化,研究表明0．1mol.L^-1MgSO4,ω=5％,乳糖,0．01mol.L^-1精氨酸,0．01mol.L^-1甘氨酸组成的保护剂具有最佳保护效果,其热稳定保护效果明显优于现在使用的对照疫苗。     

2株甲型肝炎病毒(L8 株、H2株)蛋白酶2A在大肠杆菌中的表达

首次把生长特性有显著差异的 2株甲型肝病毒 (L8株、H2 株 )的蛋白酶 2A基因分别用基因工程技术克隆到大肠杆菌表达载体 pGEX -KG上 ,重组质粒转化至大肠杆菌 (E .coliBL - 2 1和DH5α)中 ,表达的结果显示 :2株甲型肝病毒的蛋白酶 2A均得以表达 ;表达量占菌体总蛋白 2 0 %以上 .为进一步纯化该蛋白酶、研究其生物学功能和与真核细胞代谢的关系奠定了基础 .     

pH值对甲肝减毒活疫苗后处理得率的影响

在甲肝减毒疫苗生产工艺中不同pH对疫苗得率有一定的影响，为提高疫苗的产量，在传统的氯仿抽提条件下，使用不同pH值(pH1.0～12.0)的磷酸盐缓冲体系进行氯仿抽提，检测抽提后甲肝病毒(HepatitisAVirus，HAV)抗原滴度和感染性滴度，结果表明经氯仿抽提后，HAV抗原滴度和感染性滴度均在pH8.0～9.0时最高，相应得率也比常规处理的得率有显著的提高.说明改进pH抽提条件对甲型肝炎减毒活疫苗后处理工艺效率的提高，成品疫苗产量的增加具有实际应用价值.     

2株甲型肝炎病毒蛋白酶2A核苷酸序列的测定与比较

从甲型肝炎病毒２个不同株感染的ＫＭＢ１７细胞中提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ特异性扩增出此２毒株病毒蛋白２Ａ基因,将２个２Ａ基因克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定,得到２个２Ａ基因的核心苷酸序列,序列比较发现它们及与ＨＡＶ野毒株相对应序列有突变存在,Ｈ２株与ＨＭ１７５相比有一个点突变,同源性为９９．７２％;与ＨＭ１７５比较,Ｈ２株和Ｌ８株第３１９７位核苷酸均由Ａ突变为Ｇ,相应的氨基酸由丝氨酸