Duchenne肌营养不良症肌肉中的诱生型一氧化氮合酶的异常表达

ＤＭＤ是一种严重危害儿童及青少年一种遗传性疾病,对８例ＤＭＤ肌肉标本的研究发现,正常肌肉中能与膜结合的ＮＯＳ活性较高,而ＤＭＤ肌肉中几乎没有膜结合ＮＤＳ活性;但两者肌肉中的可溶性ＮＯＳ的活性均较高。通过Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和免疫组织化学梁色我们首次发现ＤＭＤ肌肉细胞中有弥漫性ｉＮＯＳ的高表达,而正常仙肉中仅不微量高度局限化的ｉＮＯＳ表达。据此,提出ＤＭＤ瓣进行性损伤机制可能与ｉＮＯＳ的异常表达     

长型肌球蛋白轻链激酶4Ig结构域的表达及单克隆抗体的制备

长型肌球蛋白轻链激酶(long myosin light chain kinase,L-MLCK)及其分子内结构域的功能还不清楚.在研究其功能时,特异性抗体是一基本工具,但目前国际上还没有制备成功特异性较好的抗体.为此,我们先在大肠杆菌E.coliBL21中重组表达了鸡L-MLCK的4Ig蛋白片段(MLCK4Ig),蛋白经纯化后作为抗原免疫小鼠.在小鼠血清中检测到特异性抗体的基础上,建立了2株杂交瘤细胞株,获得抗鸡MLCK4Ig的单克隆抗体.该抗体可以特异与鸡L-MLCK和鸡MLCK4Ig反应.本文并对该抗体的特性及应用进行了讨论.结果表明,我们部分解决了L-MLCK的抗体缺乏问题,为研究L-MLCK及MLCK4Ig片段的功能提供了重要工具.     

NF—IL6对iNOS基因表达的负调控

诱生型一氧化氮合酶基因的调控序列中含有ＮＦ－ＩＬ６的识别元件，但ＮＦ－ＩＬ６对ｉＮＯＳ基因的调控功能目前尚不清楚。研究发现ＰＳ２／０骨髓瘤细胞能低剂量持续表达ｉＮＯＳ，该利用该模型将含有ｉＮＯＳ调控序列的报告基因质粒与ＮＦ－ＩＬ６的表达质粒共转染至ＳＰ２／０细胞，观察到ＮＦ－ＩＬ６５的表达能抑制ｉＮＯＳ基因的表达，并呈剂量效应关系，初步认为ＮＦ－ＩＬ６是ｉＮＯＳ基因表达的负调控因子。     

淋巴细胞对自由基的潜在调节作用

机体内的自由基不断地产生,同时也不断地清除,以达到自由基代谢平衡。机体内存在一套天然防御系统,如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等.这些物质在体内呈相对稳定量,属固有调节,那么机体淋巴细胞系统是否参人自由基的调节?目前尚无报道.我们体外实验研究发现,淋巴细胞由IL-2激活后,对活性氧自由基具有明显的清除作用,且对氧化溶血有明显的抑制作用.这一现象的发现对生物体内的自由基代谢及其病理损伤调节研究提供了新的依据.     

长肌球蛋白轻链激酶的5DFRXXL序列促使肌动蛋白聚集成束

长肌球蛋白轻链激酶(L-MLCK)含有5个DFRXXL序列, 可与丝状肌动蛋白(F-actin)结合. 结合动力学结果提示, 一个DFRXXL序列可与F-actin中的一个单体结合, 但其生物学意义仍不清楚. L-MLCK的5DFRXXL序列既然含有多个actin的结合位点, 推测有可能它通过该序列发挥一个F-actin成束蛋白的作用. 为此, 体外表达并纯化了HA标记的重组5DFRXXL蛋白, 并通过结合动力学实验分析了重组5DFRXXL蛋白与肌丝或F-actin的结合特征, 结果表明, 重组5DFRXXL蛋白与F-actin和肌丝均具有较高的亲和力, 其中与肌丝的结合常数K_D为0.45 μmol/L, 与F-actin的结合常数为0.41 μmol/L. 通过交联实验发现, 重组5DFRXXL蛋白可以有效地交联F-actin并使其形成大分子聚集物. 应用激光共聚焦和电子显微镜方法观察到该聚集物具有典型的F-actin蛋白束结构. 将5DFRXXL的表达质粒转染真核细胞后, 可见5DFRXXL能促使细胞边缘的“微绒毛”结构形成, 可能与5DFRXXL聚集F-actin的活性有关. 这些结果表明, L-MLCK除能通过其磷酸激酶活性控制细胞收缩外, 还可能作为一个新的F-actin成束蛋白影响细胞骨架形成.