文蛤多肽粉对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用及免疫调节作用

将文蛤肉以复合胰蛋白酶酶解,经喷雾干燥工艺得到了文蛤多肽粉,研究文蛤多肽粉对肝癌细胞的抑制作用和对昆明种小鼠的急性毒理作用和免疫调节作用,结果显示文蛤多肽粉对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721具有明显的杀伤作用,使细胞变形以至破裂从而抑制癌细胞的生长,抗肿瘤作用明显;文蛤多肽粉给药组的胸腺指数和脾脏指数较空白对照组明显升高,提示文蛤多肽粉能促进小鼠胸腺和脾脏的生长发育,增强免疫力.     

文蛤多肽对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

研究了文蛤多肽对体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用,结果表明,经5.0μg/mL文蛤多肽处理的体外培养的人肝癌细胞(SMMC-7721)生长缓慢,倍增时间延长,细胞生长抑制率达89.4%;处理后的癌细胞形态发生明显改变,处于G0/G1期的细胞明显增多,而S期和M期细胞减少,出现明显的凋亡峰,凋亡率为22.3%.实验结果表明,文蛤多肽能有效地抑制体外培养肝癌细胞的增殖活动,可通过改变肝癌细胞的形态及细胞周期而明显抑制细胞的增殖.     

文蛤抗癌多肽抑制肝癌细胞SMMC-7721差异蛋白质组分析

为了研究文蛤抗癌多肽对肝癌细胞抑制作用的蛋白表达差异,寻找并鉴定差异蛋白质,探讨多肽抑制肝癌细胞的作用机理,本文通过双向电泳、考马斯亮蓝染色、Melanie 4双向软件分析、质谱技术(MALDI-TOF-MS)和数据库检索分析多肽作用SMMC-7721后的差异蛋白质.利用差异蛋白质组方法分析了抗癌多肽对肝癌细胞SMMC-7721抑制后的蛋白变化,找到差异点并进行了质谱鉴定(MALDI-TOF-MS).结果表明,通过对差异蛋白功能的分析,推测抗癌多肽可能引起了肝癌细胞的凋亡,为进一步的抗癌多肽抑制肝癌细胞作用的研究提供了理论基础.     

胆管癌血清双向凝胶电泳技术的优化

本研究为筛选胆管癌癌变的标志物,开发相应的药物研究,通过对胆管癌血清双向电泳的样品处理、pH范围、上样量的选择、电泳参数的设置和SDS凝胶电泳染色方法等进行比较优化.确定了样品预处理后通过Millpore公司推出的Montage Albumin Deplete kit去除血清中高丰度的白蛋白,再经丙酮沉淀,用裂解液溶解后,采用pH 3.5～10与pH 5～8的两性载体电解质以体积比1∶ 4混合使用,100 μg的上样量,12.5%的SDS-PAGE胶,16 mA/胶进行双向电泳的电泳体系.优化了胆管癌血清双向凝胶电泳的条件,得到了分辨率较好的胆管癌血清的蛋白图谱,为进一步的研究奠定了基础.     

金属离子对青霉葡萄糖氧化酶的效应研究

研究了几种金属离子对青霉(Penicillium amagasakiense)葡萄糖氧化酶(简称GOD,EC.1.1.3.4)活力的影响.金属离子对酶活力的影响表明:Na+、K+、Ca2+、Pb2+、Mn2+等对酶活力基本没有影响;Al3+、Zn2+对酶有一定的激活作用;Ag+、Hg2+、Mg2+、Cd2+、Cu2+、Co2+等对该酶活力有不同程度的抑制作用.其中Ag+、Cu2+、Hg2+对酶的抑制作用较强,随着抑制剂浓度增大,酶活力呈指数下降,导致酶活力下降50%的抑制浓度为0.08、10.0 和31.25 μmol/L.进一步研究了Ag+的抑制动力学,结果显示:Ag+对酶的抑制作用为竞争性可逆抑制,抑制常数(KI)为0.065 μmol/L.该研究对青霉葡萄糖氧化酶的应用具有一定的参考价值.     

文蛤多肽粉的成分分析

以文蛤肉为原料,采用复合胰蛋白酶酶解,通过喷雾干燥工艺得到文蛤多肽粉.根据检验标准GB1519.3-2003食品急性毒性试验中最大耐受剂量法,对清洁级KM小鼠无毒害作用,作用后小鼠均健康无异常反应,解剖无明显病变,其LD50>15 g/kg体质量.对文蛤多肽粉组成成分进行分析,测定了其总氮、蛋白质、氨基酸、总糖、还原糖、脂肪、灰分及Na、K、Ca、Mg、Fe、Cu、Zn、Cd、Ag、Pb等金属元素的含量.应用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱法(MALDI-TOF)分析了文蛤多肽粉分子量的分布范围.结果表明,该文蛤多肽粉中蛋白质、氨基酸和对人体有益的金属元素含量丰富,对人体有害的重金属含量都大大低于国家食品检验标准的安全剂量,氨基酸种类齐全;多肽分子量均小于5 200 u,其中分子量小于1 000 u的多肽占总多肽含量的69.03%.     

河蚬提取物对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

以河蚬(Corbicula fluminea)为材料,经过甲醇抽提,乙酸乙酯萃取等方法得到河蚬提取物(CFE).用MTT法检测其对肝癌细胞株的抑制作用,借助光学倒置显微镜以及流式细胞术考察CFE对细胞的形态及细胞周期的影响.实验结果表明:CFE对肝癌细胞SMMC-7721有增殖抑制作用,处理72 h细胞形态发生了明显变化,其IC50值为70 μg/mL.FMC的结果显示,经CFE处理后的肝癌SMMC-7721细胞出现明显的凋亡峰.这说明CFE有效抑制了体外培养的肝癌细胞增殖,并且能够改变癌细胞的形态及细胞周期的分布,诱导癌细胞出现凋亡.     

暹罗鳄胆汁提取物对人胆管癌MZ-ChA-1细胞的抑制作用

以暹罗鳄(Crocodylus siamensis)胆汁为材料,应用细胞培养、细胞计数、Hoechst33258染色、流式细胞仪等技术研究暹罗鳄胆汁提取物对人胆管癌MZ-ChA-1细胞凋亡的诱导作用.实验结果显示,胆汁提取物可明显诱导人胆管癌MZ-ChA-1细胞的凋亡,经1.75 mg/mL暹罗鳄胆汁提取物诱导处理24 h后,人胆管癌MZ-ChA-1细胞的增殖活动受到显著的抑制,细胞生长抑制率达86.71%;光镜观察结果显示,暹罗鳄胆汁提取物处理细胞后,细胞体积缩小,细胞核固缩;细胞核经Hoechst33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光;细胞周期检测出现G0/G1期细胞比例升高,S和G2/M期细胞比例下降.研究结果表明,暹罗鳄胆汁提取物对人胆管癌MZ-ChA-1细胞凋亡的诱导具有显著作用,从而为进一步研究细胞凋亡机制提供重要基础和研究依据.     

胃癌细胞SGC-7901双向电泳系统的建立及优化

文蛤抗癌活性多肽对多种癌细胞有抑制效应,具有良好的药物开发前景.双向电泳技术的进步为药物的开发提供了理想的技术平台.我们通过对胃癌细胞SGC-7901总蛋白双向电泳技术的建立以及初步优化对一些环节如样品处理的方法、上样量的选择、电泳参数的设置、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行了优化得到了分辨率较好的胃癌细胞的蛋白图谱,为进一步的文蛤抗癌多肽抑制胃癌细胞作用的蛋白组学研究提供实验工作的基础.     

胃癌细胞SGC-7901双向电泳系统的建立及优化

文蛤抗癌活性多肽对多种癌细胞有抑制效应，具有良好的药物开发前景．双向电泳技术的进步为药物的开发提供了理想的技术平台，我们通过对胃癌细胞SGC-7901总蛋白双向电泳技术的建立以及初步优化对一些环节如样品处理的方法、上样量的选择、电泳参数的设置、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行了优化得到了分辨率较好的胃癌细胞的蛋白图谱，为进一步的文蛤抗癌多肽抑制胃癌细胞作用的蛋白组学研究提供实验工作的基础．