2个棒状杆菌质粒pXZ10142和pXZ10145.1及其转座子TN45的特征分析

对1株棒状杆菌1014中分离到的2个质粒pXZ10145．1和pXZ10142进行了相互关系分析．序列分析显示pXZ10142源自pXZ10145．1．pXZ10145．1包括6个开放读码框(open reading frame,ORF),其中ORF1编码247个氨基酸,经缺失分析是复制酶．在pXZ10145．1上发现1个转座子TN45,转座子上有CMR基因和TNP基因．一对颠倒重复序列IR1a和IR1b位于pXZ10145．1和pXZ10142的交互处,两边是顺向重复序列ATCTAG．     

含FMDV中和表位的重组病毒颗粒的构建及鉴定

针对FMDV的疫苗研究一直是防控口蹄疫的重点,而病毒样颗粒(VLPs)形式的疫苗因其安全性和近似传统灭活疫苗的良好免疫效果,近年来逐渐成为疫苗研究的一个新方向.本实验利用猪圆环病毒PCV2的衣壳蛋白(CAP)作为载体,分别插入FMDV MYA98毒株的抗原表位组合——VP1蛋白上B细胞表位141~160aa(B)与串联的B细胞和T细胞表位141~160aa-21~40aa-141~160aa(BTB),构建对应重组杆状病毒,分别命名为reBAC-CAP-B,reBAC-CAP-BTB.将上述病毒颗粒转入Sf9细胞表达,收获重组杆状病毒并再次感染Sf9细胞扩大病毒滴度,获得目的蛋白CAP-B,CAP-BTB,经过SDS-PAGE,Western blot鉴定正确,透射电镜观察到20~30nm大小的目的颗粒.     

农杆菌介导人肝再生增强因子转化河套蜜瓜的研究

利用三亲融合法将含有人肝再生增强因子(hum an augm en ter of liver regeneration,hALR)的果实特异性表达载体pPZP-CAN导入农杆菌LBA 4404,转化河套蜜瓜子叶外植体,经诱导与筛选获得了抗性再生植株,PCR扩增、PCR-Sou thern和斑点杂交检测证明hALR已整合入河套蜜瓜再生植株基因组中.     

O型口蹄疫病毒VP4蛋白一个保守性表位的精细鉴定

口蹄疫病毒(FMDV)的结构蛋白VP4在7个血清型之间是非常保守的,对其抗原表位最小基序的测定有助于开发广谱性多肽疫苗.本研究采用生物合成肽法,利用豚鼠抗FMDV O型标准血清,对最新流行的FMDV O型毒株O/BY/CHA/2010的VP4蛋白进行了线性表位扫描作图研究.结果表明:在覆盖VP4蛋白全长序列的10个18聚肽中,发现1个能与豚鼠抗FMDV O型标准血清发生免疫印迹反应的抗原性肽VP4-3;B细胞表位鉴定确定了抗体识别VP4-3的最小基序是INNYYM;该表位位于VP4蛋白的三维结构表面;对7个FMDV血清型的122个毒株同源蛋白质进行序列比对,发现这一表位在7个FMDV血清型的120个毒株中是100%保守.     

以减毒猪霍乱沙门菌为载体的抗O型口蹄疫病毒重组活菌苗在家兔体内免疫应答的初步研究

将含有口蹄疫病毒疫苗基因的真核表达质粒pBO1经过中间宿主鼠伤寒沙门菌LB5010修饰后,电转化到减毒的猪霍乱沙门菌C500中,构建成抗O型口蹄疫病毒的重组活菌苗pBO1／S．cho．血清凝集实验验证,筛选到的转化菌仍然具有猪霍乱沙门菌的血清学特性,即具有免疫原性．采用口服方式免疫家兔,检测重组菌在家兔体内诱导的免疫应答．家兔免疫后8周,分离脾脏T细胞,检测T细胞增殖情况．结果显示,口服DBO1／S．fho的家兔T细胞在FMDV特异性抗原的刺激下有明显的增殖反应,刺激指数SI〉11;免疫后2周和8周分别取家兔静脉血,用液相阻断ELISA法检测血清中针对FMDV的特异性抗体,pBO1／S．cho组家兔产生的抗体效价为1／32。     

内蒙古岱海9种鲤科鱼LDH同工酶谱的比较研究

用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对岱海水体中９种鲤科鱼类进行了ＬＤＨ同工酶谱比较研究．结果表明，种间谱型有明显差异．同工酶谱经主成分分析（ＰＣＡ）表明，草鱼和瓦氏雅罗鱼被划为一类群，在分类学上它们属雅罗鱼亚科，红鲤和普鲫被划为一个类群，它们属于鲤亚科，而红锗、团头鲂和Ｈ．ｌｅｕｃｉｓｃｕｌｕｓ被划为另一类群，它们均属亚科；鳙和白链在分类学上属鲢亚科，同工酶分析表明：鳙接近鲤亚科，而白鲢更接近于亚科．可见，这些类群的划分与经典系统分类基本上一致，表明ＬＤＨ同工酶谱的主成分分析在鱼类分类和演化研究中是一可取的研究方法．     

黄河鲤和德国镜鲤及其杂种F1同工酶的比较研究

本研究用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，以亲本黄河鲤（ＣｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏＬ．（ＹｅｌｌｏｗＲｉｖｅｒｃａｒｐ））和德国镜鲤（ＳｅａｔｔｅｒｅｄＣｙｐｒｉｎｕｓＣａｒｐｉｏ．Ｌ．ｍｉｒｒｏｒ）及其杂种Ｆ＿１的肝脏、脾脏、心、肾脏、脑和肌肉为材料，进行了乳酸脱氢酶同工酶（ＬＤＨ），苹果酸脱氢酶同工酶（ＭＤＨ）和酯酶同工酶（ＥＳＴ）电泳图谱的比较分析，结果表明，同种鱼不同组织的同工酶谱有明显的组织特异性，亲本及Ｆ＿１的同种不同组织同工酶谱也有差异，亲本各组织的大多数同工酶在Ｆ＿１代得到表观，杂种Ｆ＿１的同工酶谱的表现又可分为三类：１）与双亲完全互补型；２）部分互补和少数亲本酶带消失型；３）产生双亲均无得以出现的酶带或杂种酶带型．本文还讨论了黄河鲤、德国镜鲤及其Ｆ＿１的同工酶的遗传基础和亚基组成．     

AsiaⅠ型口蹄疫病毒基因工程多肽疫苗的构建及其免疫原性分析

为了构建Asia Ⅰ型口蹄疫病毒多肽疫苗,用反转录PCR方法扩增VPI基因并测得该基因的核苷酸序列．将VPI（133AA-163AA）、VP2（1AA～33AA）抗原表位基因分别与卢一半乳糖苷酶基因（简称LacZ＇）3’末端相连构建表达质粒LacZ’-VIP和LacZ’-VP2．化学合成VP1（133AA～163AA）-VP2（1AA～33AA）-VPl（133AA～163AA）串联重复抗原表位DNA,然后分别连接在β-半乳糖苷酶基因和IgG重链恒定区基因的3’末端,构建两种重组表达质粒LacZ’-VPl（133AA--163AA）-VP）2（1AA～33AA）-VP1（133AA-163AA）（命名为pTl）和IgGvPl（133AA～163AA）-VP2（1AA～33AA）-VPl（133AA-163AA）（命名为pT2）．通过Westernblot、血清中和抗体效价测定、T细胞增殖反应及豚鼠抗病毒保护实验分析所构建疫苗的免疫原性及有效性．结果显示pT1、pT2表达的融合蛋白能够诱发豚鼠产生较高的中和抗体及刺激豚鼠T细胞增殖．pT1、pT2两种融合蛋白分别2次免疫豚鼠后,100％的豚鼠能抵抗100 ID50 AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻击．pT2融合蛋白1次免疫豚鼠后70％的豚鼠能抵抗100 ID50 AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻击．     

多个发夹RNA的混合使用抑制O型和AsiaⅠ型口蹄疫病毒的复制

通过对国内流行的口蹄疫病毒(FMDV)毒株的序列分析,锁定RNA干扰的3个目标基因即3D,VP4和2B, 分别编码聚合酶POL,病毒结构蛋白VP4和非结构蛋白2B,这3个靶基因序列在不同流行毒株之间相对保守.分别设计合成靶向这些基因序列的发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA)表达模板,构建了5个shRNA表达质粒p3D-NT56,p3D-NT19,pVP4-NT65,pVP4-NT19和p2B-NT25.进行单独应用或混合应用,于细胞水平和乳鼠水平检测其抗病毒活性.结果显示,3D-NT56/19,VP4-NT65/19和2B-NT25 shRNA对O型FMDV均有抑制作用,但是对AsiaⅠ型FMDV,仅2B-NT25 shRNA具有较显著的抑制作用.3个shRNA表达质粒的混合使用(p3D-NT56+pVP4-NT65+p2B-NT25,p3D-NT19+pVP4-NT19+p2B-NT25),不仅能够交叉抑制不同血清型FMDV的复制,而且这种抑制作用较单一shRNA延续更长的时间.     

黄芪属植物过氧化物酶同工酶的研究

用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,以黄芪属A.adsurgens,A.discolor,A.hocrntchy,A.mahoschanicus,A.melilotoides,A.dahuricus 6个种的2片真叶整体幼苗为材料,进行了过氧化物酶同工酶谱的分析.结果表明,黄芪属这6个种共有16条不同的酶带,各种间酶带数量和相对迁移率有着显著差异.上述各种的酶带数及迁移率的变化范围分别是6条(Rf0.03～0.35),7条(Rf0.03～0.56),8条(Pf0.03～0.07),7条(Rf0.11～0.49),7条(Rf0.04～0.54)7条(Rf0.14～0.45).据谱带条数越多和变化