激光与一些理化因子遗传诱变效应的比较研究

我国自1973年开展激光育种试验以来,先后育出水稻、小麦、油菜、蓖麻蚕、家蚕、白薑菌等新品种,在育种实践上证明激光有一定的作用。在激光遗传效应理论研究方面,观察到激光照射后能引起染色体畸变及细胞亚显微结构的变化,有一定的诱变率。但也有提出并未发现激光具遗传诱变效应的初步报告。为了更好地确定激光在遗传育种中的应用价值,我们将激光与其他诱变剂进行了对比实验。     

大麦染色体的激光微束切割、片段分离及体外扩增

用Ｎｄ：ＹＡＧ激光微束对大麦７Ｈ染色体进行切割并利用玻璃针分离了７ＨＳ端部片段,对获得的染色体片段ＤＮＡ进行了２次ＬＡ－ＰＣＲ体外扩增,扩增片段长度为５００－３０００ｂｐ,大多数集中在１０００ｂｐ,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析证实扩增片段来自大麦基因组。     

王百合单染色体DNA文库的构建

以王百合为模式植物建立了简单快速分离植物单染色体及扩增和克隆其DNA的方法 ,即显微操作分离单个染色体并放入Eppendorf管中 ,经Sau 3A酶切后在染色体DNA片段两端加上Sau 3A寡核苷酸人工接头 ,然后以寡核苷酸人工接头中的一条链为引物进行两轮PCR扩增 .PCR产物为 30 0～ 2 50 0bp ,多数为10 0 0bp左右 ,经Southern杂交证实PCR产物来自王百合基因组DNA .对单染色体第二轮PCR产物进行克隆 ,构建单染色体DNA文库 ,得到约 10 0 0 0 0个重组子 .对其中 84个重组子进行分析 ,插入片段为 30 0～180 0bp ,平均为 780bp .与以往方法相比 ,此方法避免了在纳升体积内酶解、连接等操作 ,扩增底物只需一条染色体而不是以往的几十条 ,而且克隆片段 (平均 780bp)大于以往的报道 (平均 6 50bp) .