物质代谢网络中葡萄糖有氧分解途径的主干道作用分析及课堂教学

生物化学中各种物质的代谢通路纵横交错,构成复杂的代谢网络,是生物化学教学的重点和难点内容.以物质代谢网络中的葡萄糖有氧分解途径为代谢的主干道,分析其组成和功能要点及与其它支路代谢途径的联系,以达到理清物质代谢网络的复杂关系,在课堂教学中突出重点和分散难点的目的.     

虎纹捕鸟蛛毒素HWTX -Ⅰ和芋螺毒素MVIIA嵌合体的固相化学合成

采用Fmoc固相合成的方法,将来自芋螺的ω-芋螺毒素(ω-Conotoxin) MVIIA (N-型钙离子通道阻断剂)中已知活性位点及可能的相关序列嵌入虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX -Ⅰ) 的非活性位点区,代替其相应序列,构建同时携带两种活性位点的多肽嵌合体.嵌合体用 MALDI-TOF质谱鉴定.通过RP-HPLC检测其氧化复性过程,摸索出嵌合体的最佳复性条件.经过两次RP-HPLC脱盐纯化.结果表明,设计合成的嵌合体在1×10-5g/mL,利用小鼠隔神经-隔肌标本的阻断实验证明嵌合体显示了27 %的天然HWTX-Ⅰ的神经毒活性.实验结果表明,HWTX -Ⅰ具有蛋白质工程改造前景.     

银杏叶黄酮体的提取方法

黄酮体化合物是植物界广泛存在的一类生理活性物质。它们不仅能防止动脉硬化,改善血液循环和降低血液胆固醇,而且具有抗菌、利胆和解痉挛功效,在临床上具有广泛的用途。银杏科植物银杏是含这类物质最丰富的植物之一,其叶中的含量高达3％左右,具有很大的开发利用价值。我们通过一系列的研究探索,总结出利用银杏叶大量提取黄酮体的两种方法,即溶剂法和柱层析法。     

虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ天然突变体的分离纯化与鉴定

通过离子交换及反相HPLC，从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到一种虎纹毒素-Ⅰ天然突变体，MALDI-TOF质谱仪分析表明该多肽天然突变体分子量为3636 Da．Edman测序结合串联质谱和氨基酸组成分析鉴定出该天然突变体的序列为H2N-ACKGV FDACT PGKNE CCPNR VCSDK HKWCK WQ-COOH，其中6个Cys形成3对二硫键，小鼠脑室注射实验表明，该天然突变体能使小鼠致死，但不能阻断小鼠膈神经-膈肌标本的神经肌肉接头传递，本研究结果表明，K32残基对于HWTX-Ⅰ的生物学活性有关键性作用。     

ω-芋螺毒素 MVIIA/虎纹捕鸟蛛毒素-I嵌合体HM-1227的合成及活性测定

用Fmoc固相多肽合成的方法手工合成了一种ω-芋螺毒素MVIIA和纹捕鸟蛛毒素-I的嵌合体HM-1227，经过RP-HPLC纯化和氧化复性，小鼠隔神经-隔肌标本的阻断实验显示此嵌合体能实现二硫键完全配对与稳定折叠并具有弱的神经毒活性。实验结果表明，ω-CtxMVIIA和HWTX-I的分子框架稳定，部分序列交换后仍能实现二硫键配对与折叠，说明该结构模体可以作为蛋白质工程的分子框架。     

虎纹捕鸟蛛毒素-IV突变体K27A-HWTX-IV的合成和复性及其生物学活性研究

用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成的方法在固相多肽合成仪上合成了用丙氨酸代替虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅳ的第27位的赖氨酸的突变体K27A—HWTX—Ⅳ，通过反相HPLC对不同条件下突变体的氧化复性结果进行监测，摸索出其最佳氧化复性条件为：0．1mol／L Tris—HCl，pH8．0，GSH 1 mmol／L GSSG 0．1mmol／L的复性缓冲液，样品浓度为0．1mg/mL。复性产物经HPLC纯化并用基质辅助激光解吸飞行时间质谱法进行鉴定，相对分子质量为4050．63Da。生物学活性实验小鼠离体膈神经—膈肌标本测活实验表明：10μg/mL天然HWTX—Ⅳ阻断小鼠离体膈神经,膈肌接头传递时间为16min，10μg/mL复性后的突变体阻断小鼠离体膈神经．膈肌接头传递时间为120min，残基的替换导致突变体生物学活性比天然毒素少，证明了第27位的赖氨酸为虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅳ活性相关的残基。     

姜黄色素提制新工艺及综合利用研究

目前,我国食品、饮料等行业广泛使用的添加剂大多是人工合成的,其中食用色素更是如此。由于这些合成色素有一定的毒副作用,长期食用会对人体健康造成严重危害,许多发达国家已经或正在淘汰合成色素,我国也作了禁止或限量使用的规定。因此,用安全无毒的天然色     

生物化学双语教材建设的探讨

随着我国双语教学的不断普及和深入,教材已成为制约双语教学进一步发展的主要因素之一.利用国外优秀原版教材是解决我国双语教材的重要途径.根据双语教学的特点和要求,对国外优质教学资源进行整合利用,只有这样才能建立符合我国国情的双语教材体系,从而促进双语教学的良性发展.     

化学合成十三肽及其副产物液质联用分析

利用反相高效液相色谱(RP-hplc)与电喷雾质谱(ESI-MS和MS/MS)联用技术直接分析用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成方法手工偶联合成的一个十三肽(Lys-Lys-Glu-Ser-Asp-Phe-Leu-Met-Phe-Val-Tyr-Leu-Val，Mr 1617．8)粗产品，以探索RP-HPLC/ESI-MS和MS/MS在固相多肽合成产物分析和副反应机制研究中的应用．RP-HPLC结果显示：合成粗产物中含有1个主成分，2个次要成分和多个微量成分；与之联用的电喷雾质谱同步准确地测定出各成分的相对分子质量(m／z)并自动对各主要成分的化学结构进行了串联质谱分析．结果证明，粗产物中的主成分即为目标十三肽，另外几个主要副产物为十三肽的残缺肽或氧化肽．对色谱和生物质谱联用技术分析合成多肽的意义和副产物形成的可能机制进行了讨论．