广西巴马小型猪活化素β_A/β_B基因cDNA克隆与序列分析

目的通过克隆广西巴马小型猪活化素(activin)βA/βB基因cDNA,分析其序列,为研究活化素的生物学功能打下基础。方法提取广西巴马小型猪发情母猪的卵巢总RNA,并以其为模板,以下游特异性引物为反转录引物,在AMV酶作用下合成cDNA;用LA-Taq进行PCR扩增出包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列,把两个序列分别连接到PMD-18载体进行克隆和序列分析。结果包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列长度分别为964 bp和791 bp,两个亚基的序列比较保守,与GenBank上发表的猪activin两个亚基同源性达到99.79%和99.62%。activinβA基因有两个碱基发生突变,其中一个在成熟肽序列上,一个在非编码序列上;βB基因信号肽序列上有三个碱基发生突变,其中一个是同义突变。     

兔眼蓝莓组织培育苗高效快繁技术

为获得兔眼蓝莓高效快繁的技术体系,以杰兔幼嫩茎段为试验材料,对增殖培养基、叶片再生体系、生根培养基、炼苗基质等组培苗生产的几个关键因素进行了优化.结果表明,WPM(改良)+1.0mg/LZT增殖培养基能使新梢增殖率达6倍以上,丛生苗生长速度快,而且株型健壮.在无菌苗叶片离叶尖1/3处,沿垂直叶片主脉方向将叶片切成二部分,叶片背面朝下接种于WPM(改良)+1.7mg/LZT培养基中,先暗培养20 d后光照培养,结果叶尖端和叶柄端的再生率分别达到93.8％和79.5％;1/4 WPM(改良)+1g/L活性碳+0.1 mg/L IBA生根培养基能使试管苗生根率达95％;以水苔藓为炼苗基质可使幼苗成活率高达100％.因此,本研究从叶片再生、增殖培养、生根培养到炼苗这一系列环节进行了优化,建立了一种可高效、快速、稳定获得优良的兔眼组培种苗的技术.     

广西巴马小型猪促生长激素释放激素成熟肽的克隆及序列分析

目的扩增广西巴马小型猪促生长激素释放激素(GHRH),分析其序列结构特点。方法以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,用特异性引物扩增GHRH外显子3,再用引物延伸悬挂PCR法扩增GHRH成熟肽,纯化后,连接、转化到大肠杆菌,筛选阳性克隆,测序。结果经测序证实广西巴马小型猪GHRH外显子3及其成熟肽的基因序列与相关文献报道一致。克隆得到的广西巴马小型猪GHRH序列全长为132 bp,其中外显子3基因序列长105bp。同源性比较发现,广西巴马小型猪GHRH外显子3基因序列与GenBank(NCBI)中报到的猪GHRH外显子3相比,同源性为97.14%,有3处发生碱基变化。结论本实验成功克隆了广西巴马小型猪GHRH成熟肽序列。