靶向survivin基因的shRNA慢病毒载体的构建及其对膀胱癌EJ细胞凋亡的影响

目的:构建survivin基因特异性shRNA慢病毒干扰载体,转染膀胱癌EJ细胞,研究survivin基因在膀胱癌细胞株中的表达抑制情况,观察survivin shRNA慢病毒载体对EJ细胞凋亡的影响.方法:以survivin基因为靶标设计shRNA干扰序列,克隆至p SIH1-H1-cop GFP慢病毒载体.干扰载体鉴定正确后转染膀胱癌细胞株EJ细胞,荧光显微镜下观察GFP表达情况,实时荧光定量PCR检测survivin基因mRNA含量变化,Western blotting法检测survivin蛋白表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测EJ细胞凋亡情况.结果:PCR扩增鉴定、DNA测序证实survivin慢病毒干扰载体构建成功;EJ细胞经干扰载体处理后,EJ细胞survivin基因mRNA水平下调了73.33%,蛋白表达受到显著抑制,EJ细胞凋亡率达到24.39%.结论:成功构建了靶向survivin基因的shRNA重组慢病毒干扰载体,可以显著降低转染细胞survivin基因的表达水平,并有效提高膀胱癌细胞凋亡率.     

金钱草联合碳酸锂预防草酸钙肾结石机制

目的:将金钱草抑制结石形成多作用靶点和碳酸锂单作用靶点相结合,探讨预防大鼠肾结石形成及作用机制.方法:90只成年雄性Wistar大鼠随机分入九组(正常、对照、低中高剂量金钱草组、碳酸锂组和低中高剂量金钱草联合碳酸锂组).经一周适应环境,5%草酸铵饲料喂养实验组大鼠一周后,以不同浓度水煎剂灌胃(1 mL/次,2次/天).第21天留取尿液/24 h、血及肾标本.检测血、尿标本各项理化指标,观察尿结晶、肾结晶沉积和病理改变.结果:血清锂仅在碳酸锂及联合治疗组检测到,且呈逐渐增高趋势,高剂量金钱草联合治疗组为1.38±0.41mmol/L.中高剂量联合治疗组的尿柠檬酸水平较中高剂量金钱草组增高53%,较碳酸锂组增高24.3%,尿量/24 h增加1倍,尿草酸水平降低1倍.结论:中剂量金钱草联合碳酸锂组对尿柠檬酸浓度表现出显著的协同调节作用,使尿柠檬酸水平较正常大鼠升高4.15倍.     

精液和睾丸组织Y染色体基因微缺失检测分析

探讨睾丸、精液基因组DAZ基因缺失的检测方法在无、少精症患者病因诊断中的意义。选择35例特发性无、少精症患者作为研究对象,其中少精症18例、严重少精症12例、无精症5例;10例正常已生育健康男性作为正常对照。应用PCR技术,检测睾丸、精液基因组中的Y染色体上特异性序列标签位点（STS）的引物扩增了解基因缺失情况。35例患者中5例表现睾丸、精液基因组微缺失,其中少精症2例,严重少精症3例;其余30例患者和10例正常对照睾丸、精液基因组未见基因微缺失。精液和睾丸组织中基因组DAZ基因缺失的检测方法是诊断无、少精症病因的一种有效方法。