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为研究BR0524基因对羊种布鲁氏菌043毒力的影响,本研究利用同源重组的原理,以BR0524基因外侧的同源臂序列构建重组质粒,将其电转化至布鲁氏菌043感受态细胞,通过卡那抗性筛选和检测引物鉴定之后进而获得羊种布鲁氏菌043-ΔBR0524缺失突变株,且该缺失突变株在15代内未发生回复性突变,遗传性稳定。将羊种布鲁氏菌043-ΔBR0524缺失突变株、羊种布鲁氏菌043和M5以106 CFU剂量腹腔接种小鼠,进行体内感染试验,并以布鲁氏菌与小鼠巨噬细胞为100∶1的感染比例侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7。结果表明:与羊种布鲁氏菌043相比,羊种布鲁氏菌043-ΔBR0524缺失突变株的载菌量几乎没有下降(P0.05),对小鼠脾脏重量变化的影响也趋于相似(P0.05);侵染小鼠巨噬细胞试验结果与动物感染试验结果也趋于一致(P0.05),这表明BR0524基因的缺失不会对羊种布鲁氏菌043毒力功能的发挥产生显著的影响。 相似文献
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通过对10种不同苜蓿的栽培品种再生体系的比较研究,以及再生条件的优化,筛选出易于再生的费纳尔,金皇后,赛特6号3个苜蓿栽培品种.结果表明:胚性愈伤组织诱导培养基:改良Ms+2,4-D2mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖3%,胚性愈伤组织诱导率为65%~92%;胚状体诱导培养基:SH+2,4-D2mg/L+6-BA0.5mg/L+LH300mg/L+蔗糖3%;胚状体诱导率为42.3%~83.4%;胚状体再分化培养基:SH+GA30.5mg/L+LH300mg/L+肌醇60mg/L蔗糖3%;胚状体萌发率为20%~75%;生根培养基:1/2Ms+NAA0.3~0.5mg/L+蔗糖2%,生根率为91%,移栽成活率93%. 相似文献
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用特异性引物扩增出兔IL-15基因片段,用KpnI和NotI双酶切后将其定向克隆到pPICZαA中,构建出重组质粒pPICZαAIL-15。将pPICZαAIL-15用SacI内切酶线性化后,电转化感受态GS115酵母细胞,用PCR法筛选阳性重组子。用1.5%的甲醇诱导重组酵母菌,取培养物上清进行重组蛋白的检测。结果SDS-PAGE电泳可在重组酵母菌培养物上清中检测到分子量为18.6kDa大小的重组蛋白。凝胶薄层扫描分析表明,3株重组酵母菌在1.5%甲醇诱导144h后,重组IL-15表达量约占培养物上清总蛋白量的6.1%~8.6%。将重组IL-15用Ni离子亲和层析纯化后,在MTT试验中表现出明显的促进淋巴细胞的增殖反应,证实表达的重组IL-15具有天然蛋白的免疫学活性。 相似文献
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牛病毒性腹泻病毒(BVDV)能够引起牛羊的持续感染,临床上很难对其根除,建立该病有效检测方法对净化畜群具有重要意义。本研究构建BVDV E0蛋白基因重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达,用重组的E0蛋白为包被抗原,确定抗原最佳包被浓度为5μg/mL,最佳血清稀释比为1∶10,最佳封闭液为5%脱脂奶粉,最佳封闭条件为37℃封闭2 h,酶标二抗稀释度为1∶5000,作用时间为30 min,样品临界值X+2S为0.278。该方法与IDEXX的BVDV间接ELISA试剂盒比较总符合率为86%,与口蹄疫病毒、牛支原体、牛传染性鼻气管炎病毒、牛副结核、牛布鲁氏菌病阳性血清无交叉反应。该检测方法能够用于BVDV抗体水平的临床检测,可为感染病畜的合理淘汰提供实验依据。 相似文献
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MLVA-16对新疆分离布鲁氏菌80/23株的鉴定与分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了对新疆布鲁氏菌分离株80/23株进行分型鉴定,本实验采用MLVA-16检测方法和常规生物学鉴定方法对布鲁氏80/23株进行研究,将测定结果与http://mlva.upsud.fr/MLVA net提供的530株布鲁氏菌数据库比较分析,应用UPGMA进行遗传进化树分析,并构建系统进化树。结果显示,常规分型方法鉴定为羊种3型,MLVA方法鉴定该菌株与德国分离株Bruce0261菌株的亲缘关系最近,属为东地中海3型,羊种1型,两种分型方法种属结果一致。结论:MLVA-16与常规生物学鉴定方法相比,具有更高的精确性,对布鲁氏菌生物型和株间差异有很高的鉴别力。并能为布病疫情流行株的溯源进化关系提供依据。 相似文献
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为了探讨铁蛋白重链多肽(ferritin heavy chain 1,FTH1)对RAW264.7细胞中凋亡相关基因表达的影响,采用RNA干扰和实时定量方法进行研究,首先提取RAW264.7细胞的总RNA,应用反转录PCR获得定量片段,制定标准曲线。将pSIREN-FTH1A/B转染到RAW264.7细胞,48 h后用绵羊种布鲁氏菌019株侵染4 h,实时定量PCR检测凋亡相关基因Mkl1、Birclb的表达,GAPDH作为内参基因,检测干扰前后凋亡相关基因mRNA的量。结果显示:转染pSIREN-FTH1的细胞被布鲁氏菌侵染后,Mkl1、Birclb基因mRNA的量较干扰前分别降低了76.3%、88.8%。FTH1可调节凋亡相关基因表达从而影响细胞凋亡的进程。 相似文献
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采用RT-PCR方法从新疆临床发病猪场采集的病料中扩增了CSFV流行株E2基因的主要抗原位点编码区,测定了15株CSFV的核苷酸序列。应用DNAstar计算机软件对6个地区6个代表株CSFV的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析,结果表明:新疆6株CSFV流行株与猪瘟兔化弱毒株(C株)核苷酸序列的同源性为80.9%~82.8%,氨基酸的同源性为86.2%~88.3%,说明新疆CSFV流行株E2基因发生了部分变异,与疫苗株相比抗原性产生一定的差异。 相似文献
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猪轮状病毒的细胞培养 总被引:1,自引:0,他引:1
在猴肾传代细胞系(MA-104)上成功培养了猪的轮状病毒。病毒接种前用胰酶处理且维持液中不含血清,连续传代后出现明显的细胞病变(CPE):细胞先肿大变圆,边界不清,后聚集、萎缩,直到死亡脱落。 相似文献
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选择了RV VP7的3个高度保守可诱发高水平体液免疫反应的中和性抗原表位,人工合成了这3个表位片段。采用了一种不需要限制性内切酶和连接酶的重组DNA方法-搭桥PCR法,方便快速地构建了轮状病毒VF7蛋白的重组表位基因,将其T/A克隆入PBS-T载体,经过测序与报道序列同源性达100%。结果表明:搭桥法PCR简单易行,快速准确,尤其是在构建2个或多个小基因片段的融合时,比酶切、连接方法更具优越性。 相似文献