RAW264.7细胞诱导分化和鉴定

为探讨RAW264.7诱导后分化的破骨细胞的鉴定方法,选出了最优方案,为破骨细胞的体外功能研究奠定了基础。通过将RAW264.7细胞以5×104接种在96孔板,分别与骨磨片共培养和单独培养,并取小鼠重组sRANKL因子以100ng/mL的浓度诱导10d后分别进行形态学和功能学鉴定和检测,HE、甲苯胺蓝、TRAP染色和扫描电镜观察。结果显示,随着诱导时间的延长,多核细胞数量增多,骨吸收陷窝数量增多;各种方法均可鉴定,HE染色、甲苯胺蓝染色鉴定方法简单但结果不可靠;扫描电镜鉴定准确但操作繁琐;TRAP染色价格较昂贵但结果特异性强、结果准确。研究表明,从形态学角度鉴定TRAP染色为最优,从功能学角度鉴定扫描电镜为最优。     

培养原代小鼠组织细胞检验细胞实验室技术操作规程

目的通过培养小鼠原代组织细胞,检验本科室己建立的一套细胞实验室技术操作规程能否满足细胞培养要求。方法培养小鼠原代成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、肝细胞、肺部细胞、脑部细胞、骨髓间充质细胞和胚胎成纤维细胞。计算原代培养成活率、传代成活率、冷冻及复苏成活率。结果成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、肝细胞、肺部细胞、脑部细胞、骨髓间充质细胞、胚胎成纤维细胞原代培养成活率分别为89%、96%、100%、100%、100%、80%、100%和90%;传代成活率分别为76%、93%、100%、92%、100%、66%、80%和92%;冷冻及复苏成活率分别为100%、100%、100%、100%、100%、100%、100%和100%。结论通过计算KM小鼠8种组织细胞原代培养、传代、冷冻与复苏的成活率,证明现有的细胞室技术操作规程基本上能够保证成功培养出常规原代细胞,并能传代、冷冻和复苏。