兔血清制备及兔来源细胞培养实验

目的制备兔血清,用于兔来源细胞的培养。方法通过兔股动脉采血,4℃冷藏过夜后析出血清。分别比较含10%兔血清和10%胎牛血清的DMEM培养液中细胞形态和增殖性能及冻存存活率。结果使用兔血清培养细胞分裂指数约为1%~2%,冻存存活率为90%;使用胎牛血清细胞分裂指数约为0.5%;细胞冻存存活率为85%。结论兔血清制备方法简便易行,所获兔血清对兔来源的细胞在增殖性能和冻存存活率方面均优于胎牛血清,适宜兔源组织的培养。     

我国特有的三个小型猪品系PGC-1基因外显子8的多态性分析

目的 分析我国特有的三个小型猪品系:巴马小型猪、中国农大小型猪、五指山小型猪过氧化物酶体增殖物激活受体γ协同激活子1基因第8外显子的单核苷酸多态性(SNPs)分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病研究中提供基础资料.方法 以三个品系小型猪基因组DNA为模板,应用特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化测序,进行BLAST比对分析.结果 测序结果表明在小型猪PGC-1基因外显子8有5个单核苷酸多态性位点为:Ala354Val(450C→T),Gly363Gly(478C→T),Arg369Arg(494C→A),Leu570Leu(913G→A),Ser551Ser(1039A→G),其中,只有450位C→T的杂合突变导致了编码氨基酸的改变.结论 小型猪品种不同PGC-1基因外显子8的多态性分布有很大差异.     

一种手性金鸡纳季铵盐的合成及催化α,β-不饱和酮的Michael加成反应研究

间-二溴甲基苯与辛可尼定在EtOH—DMF—CHCl，混合溶剂中回流6～7h，得到溴化α,α′-双辛可尼定-m-二甲苯，产率70％．将其用于催化查尔酮与丙二酸二乙酯的Michael加成反应，获得了最高产率70％，最大e．e％值为89％的对映选择性．     

三个品系小型猪Ⅱ型糖尿病模型的比较研究

目的比较三个品系小型猪对高糖高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病模型的敏感性,为我国小型猪在Ⅱ型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法4~5月龄巴马小型猪、五指山小型猪和中国农大小型猪各6头,以4头中国农大小型猪为对照,同步开展高糖高脂饲料喂养试验,试验周期8个月。每月称1次体重,测定血糖、血清胰岛素含量,每2个月进行1次静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT),测定脂质代谢相关指标。结果巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料比较敏感,在饲喂5~6个月后,开始出现糖代谢异常,表现为显著肥胖、血清胰岛素升高和胰岛素敏感性下降。至实验后8个月,巴马小型猪和五指山小型猪各有1头发展为糖尿病,分别有3头和2头出现糖尿病前期症状。中国农大小型猪对高糖高脂饲料诱发糖尿病相对不敏感,实验期间空腹血糖水平、血清胰岛素含量、胰岛素敏感指数和IVGTT一直无显著变化,仅在实验后7个月开始表现肥胖,8个月出现胰岛素敏感性减低。三个品系小型猪在高糖高脂饲喂后,血脂相关指标(TG,CHO,HDL-C,LDL-C)普遍升高,以巴马小型猪升高幅度最大。结论巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病比较敏感,品系内个体差异较大。中国农大小型猪相对不敏感。这一结果为进一步的Ⅱ型糖尿病相关基因分析和高敏感家系培育研究提供了基础资料。     

五指山小型猪动脉粥样硬化模型的病理学研究

目的观察小型猪动脉粥样硬化模型动脉病变的形态特点、分布规律和发展过程,为小型猪动脉粥样硬化模型的应用提供基础资料。方法3~4月龄五指山小型猪30头,随机分为3组,对照组6头,喂基础饲料,实验组分别饲喂含1.5%胆固醇的高脂饲料(T1组,12头)和含3.0%胆固醇的高脂饲料(T2组,12头),在实验后4、6、8和12个月,T1和T2组分别处死动物3头,对照组分别在实验后6个月和12个月各处死3头,对动物的心血管系统和主要脏器做病理学检查。结果实验后4个月,实验组动物均出现明显的早期动脉粥样硬化病变,至6个月和8个月,动脉病变逐渐加重,在实验后12个月,于动物的大、中血管观察到广泛的动脉病变。动脉病变易发且严重的部位为腹主动脉、髂动脉和冠状动脉,动脉病变少见且较轻的部位为颈总动脉、肠系膜总动脉和肾动脉。动脉病变大体分为3种类型,分别为以胸主动脉为代表的脂纹性病变,以腹主动脉为代表的纤维斑块病变和以冠状动脉为代表的中小动脉病变。动脉病变的发展过程在不同血管和不同部位也有差别,动脉病变的出现时间和严重程度动物个体之间差别较大,T1组和T2组差别不十分显著,以T2组略重。结论小型猪动脉粥样硬化病变与人类十分相似,但是不同部位的血管病变类型和发展过程有所不同,应根据实验需要选择观察血管和实验周期。     

五指山小型猪动脉粥样硬化模型的建立

目的建立五指山小型猪动脉粥样硬化模型,探讨小型猪动脉粥样硬化模型复制规范。方法3~4月龄五指山小型猪30头,随机分为3组:对照组6头,喂基础饲料;实验组分别饲喂含1.5%胆固醇的高脂饲料(T1组)和含3.0%胆固醇的高脂饲料(T2组)。实验过程中进行一般临床观察和血脂相关指标检查,在实验后4、6、8和12个月,实验组分别处死动物3头,对照组分别在实验后6个月和12个月各处死3头,对动物的心血管系统和主要脏器做病理学检查。结果高胆固醇、高脂饲料能够引起五指山小型猪血清胆固醇指标升高和动脉粥样硬化病变形成。实验组血清LDL-C、TC和HDL-C值在实验后1个月显著升高,升高幅度最高分别达到对照组的13.3~15.0倍、8.2~10.2倍和3.3~4.2倍。在实验后4个月,实验组动物均出现明显的早期动脉粥样硬化病变,至6个月和8个月,动脉病变逐渐加重,最严重的病变可达病理分级的Ⅳ级。至实验后12个月,在动物的大、中动脉观察到广泛的病变,最严重部位达到病理分级的Ⅴ级。动脉病变易发且严重的部位为腹主动脉、髂动脉和冠状动脉,动脉病变少见且较轻的部位为颈总动脉、肠系膜总动脉和肾动脉。血脂相关指标的升高幅度、动脉病变的出现时间和严重程度T2组比T1组略重,但是差异不十分显著。结论小型猪食饵性动脉粥样硬化模型的诱导配方中,胆固醇含量以1.5%~2.0%为宜,观察早期动脉病变诱导时间需要4至8个月,晚期病变则需要12个月以上的诱导时间。