八肋游仆虫中心蛋白的核磁共振研究

利用液体核磁共振方法对八肋游仆虫中心蛋白全长蛋白(EoCen),LC端结构域(EoCen-LC)和N端结构域(EoCen-N)进行了分析,并研究了蛋白与钙离子的相互作用情况.研究结果表明,未加入钙离子,全长蛋白,LC端结构域和N端结构域谱图重叠严重,峰型较差,说明未折叠成良好的三级结构,存在较大的构象交换或一定程度的聚集;与钙离子结合后全长蛋白,LC端结构域三级结构有所改善,但仍然无法用液体核磁共振方法进行进一步的结构研究.N端结构域与钙离子结合后谱峰分散性好,说明N端结构域具有较好的三级结构,能够应用核磁共振的方法进行结构解析.     

重组人乙酰胆碱受体α亚基的克隆及初步表达

为获得高表达的人乙酰胆碱受体 (human acetylcholine receptor,Ach R)α亚基蛋白 ,根据已知的乙酰胆碱受体α亚基序列 ,设计并合成了一对引物 ,以含乙酰胆碱受体α亚基 DNA的重组质粒 p UC- Ach R为模板 ,应用PCR技术 ,扩增乙酰碱受α亚基的片段。将该扩增片段与载体 p ET32 M分别用 Bam HI/ Hind III双酶切 ,然后在T4 DNA连接酶作用下 ,将乙酰胆碱受体α亚基片段插入载体 p ET32 M中 ,且与载体中的硫氧还蛋白 (约 14 k D)基因融合。重组质粒 p ET32 M- Ach R含 T7启动子 ,为 IPTG诱导型。经双酶切鉴定 ,序列测定及工程菌初步表达分析 ,表明获得了正确的重组质粒 p ET32 M- Ach R,且在大肠杆菌 BL2 1中有明显表达 ,硫氧还蛋白 -乙酰胆碱受体融合蛋白的分子量约 37k D,但主要以包涵体形式存在。