利用CRISPR/Cas9系统构建LMNA基因突变 AC16人心肌细胞系

LMNA基因突变引发核纤层蛋白(LaminA/C)及其互作蛋白表达异常，引起机体一系列生理学反应，导致核纤层蛋白病发生，目前其具体致病机制尚不清楚。本文利用CRISPR/Cas9技术，选取符合sgRNA筛选原则的致病突变位点，成功构建了携带LMNA突变Q517X的细胞系，并对突变细胞系与LaminA/C相连或互作的LaminB1、PCNA、P53、PKCα等基因的RNA表达水平与蛋白表达水平及突变细胞核膜骨架形态进行检测，发现：Q517X突变细胞的LaminB1、P53、PCNA基因mRNA表达量显著降低约70%;LaminA/C蛋白几乎不表达，PKCα、LaminB1、P53等蛋白的表达量分别降低75%、60%、80%。结果表明，Q517X突变通过改变AC16人心肌细胞LMNA相关基因的表达进而影响细胞核正常骨架结构与功能。