绵羊精子冷冻损伤的蛋白质组学研究进展

绵羊冻精技术经过半个多世纪的发展,目前的冷冻效率仍然很低,无法支撑大规模的产业化应用.奶绵羊产业的发展给绵羊冻精和性控冻精的研发和应用提出了新的需求.本文介绍了绵羊精子质膜的构成特点及其对冷冻损伤的影响,论述了经典蛋白质组学技术和高通量定量蛋白质质谱技术在绵羊等家畜精子冷冻损伤研究中的应用及其进展,阐释了开展绵羊精子冷冻损伤的质膜蛋白质组研究的必要性及其最新研究方法,并对绵羊冻精未来的潜在研究方向和应用前景进行了展望.     

Ran结合蛋白RanBP1的生物学功能及研究进展

RanBP1是RanGTPase循环过程中的关键调节因子,参与细胞核质运输、中心体的装配、微管的聚合、纺锤体的组装以及核膜的重建等.RanBP1表达量异常影响染色体的正常分离,使细胞分裂异常,导致细胞凋亡,甚至引起肿瘤发生.研究证实在多种肿瘤组织细胞中RanBP1表达量异常增高.本文综述了RanBP1氨基酸序列信息以及晶体结构信息,对RanBP1的生物功能以及在不同肿瘤中的表达情况进行了总结分析,探讨了RanBP1作为抗肿瘤药物潜在靶标的可能性.     

样品前处理对牛精子全蛋白质组鉴定的影响

本文主要分析样品前处理对牛精子全蛋白质组鉴定的影响,文中对5种不同的蛋白质提取液和3种不同的酶解方法进行了系统地分析比较.5种蛋白质提取液:溶液BS(4%SDS,0.1mol/L Tris-HCl,0.1mol/L DTT);溶液BU(8mol/L Urea,0.1mol/L Tris-HCl);溶液BT(7mol/L Urea,2mol/L Thiourea,0.1mol/L Tris-HCl,0.4%Chaps);溶液BR(购自Thermo,货号89901);溶液BD(2%SDC,50mmol/L NH4HCO3,25mmol/L NaCl).3种酶解方法:溶液内酶解、胶内酶解以及膜上酶解(FASP).实验结果显示:牛精子蛋白质提取能力BS最强,BU最弱;BT、BR以及BD相当.BS-FASP不适用于牛精子蛋白质组学研究.胶内酶解鉴定到的蛋白质均多于FASP法,但是胶内酶解操作过程复杂繁琐,耗时长.基于BD的溶液内酶解法鉴定到的蛋白质数量最多,膜蛋白提取鉴定能力较强,且操作时间最短,是较为理想的方法.     

黄牛Myostatin基因编辑研究

黄牛是我国的特色资源,为经千年驯养选育的古老品种,蕴藏着极为丰富的优良遗传种质资源,具有耐粗饲、抗逆性好、适应性强与肉质细嫩等优点。但由于长期役用为主,存在生长速度慢、后躯不发达、育肥增重速度慢、胴体产肉少等缺陷,达不到国际肉用牛的要求。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以影响肌肉发育的myostatin基因为靶标,选择不同位点进行定点敲除,经体细胞克隆技术培育基因编辑牛。共构建了4个编辑载体,得到25株阳性细胞系;将481枚基因编辑克隆胚胎分别移植入253头受体牛,生产基因编辑牛9头。利用编辑牛精液分别与鲁西牛、蒙古牛和西门塔尔牛配种,生产了221头F1代;观察并测量F1代生长发育指标,检测血液生理生化指标,并对F1代的屠宰性状做了系统分析。结果表明,myostatin基因编辑牛的各项体尺指标普遍优于普通牛,后躯发育极显著提升,体型外貌呈典型肉牛特征。所选用的基因编辑位点不影响胎儿发育,出生体重正常,无明显难产现象。胴体肉产量显著提升,肉质品质不受影响。本研究证实,CRISPR/Cas9技术对myostatin基因进行编辑改造,可实现黄牛肉用性能提升,在黄牛品种改良与新品...     

牛X与Y精子差异蛋白质组学研究

本研究旨在利用蛋白质组学技术探究牛X、Y精子的差异蛋白质，为X、Y精子免疫分离技术的开发与优化提供一定的理论基础。冷冻保存的安格斯牛X和Y精子样品各三组进行非标定量蛋白质组学研究，共鉴定到1139个蛋白质，其中X精子鉴定到1023个蛋白质，Y精子鉴定到1022个蛋白质。X与Y精子间具有极显著差异(P<0.01)的蛋白质有40个，其中X精子高表达蛋白质7个，Y精子高表达蛋白质33个，Y精子单独鉴定到的蛋白质31个。X与Y精子差异蛋白质集中在代谢过程，大部分具有催化活性，主要位于线粒体内膜；Y精子高表达蛋白质主要参与各类氨基酸代谢及能量物质代谢过程，X精子高表达蛋白质主要参与氧化磷酸化途径。X、Y精子差异表达蛋白说明X与Y精子在运动能力、抵抗氧化应激及能量代谢等方面存在差异。