星海链霉菌卤化酶重组蛋白在大肠杆菌中可溶表达

大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)是表达异源蛋白的良好宿主,但常遇到蛋白表达产物不可溶的困难.在对来自星海链霉菌的卤化酶基因sinH进行大肠杆菌异源表达时,为克服蛋白表达产物可溶性低的问题,探讨了不同载体对蛋白可溶表达的影响.利用pET28a进行SinH表达时不能得到可溶的目标蛋白;使用含有泛素标签及内含肽的载体pHUIE实现了卤化酶蛋白SinH的可溶表达,但纯化后纯度不高;利用带有链霉菌分子伴侣蛋白基因的载体pET28a-SinH与pETcoco-pL1SL2在E.coli BL21(DE3)中共表达,在30℃,0.1mmol/L IPTG诱导条件下表达4h,成功获得大量可溶蛋白,使用亲和层析(Ni-NTA)纯化,获得了较纯的目标蛋白SinH,上述研究结果为在大肠杆菌中进行其他链霉菌蛋白的可溶表达提供了参考.     

喜树愈伤组织诱导及喜树碱的产生

喜树碱是继紫杉醇后又一很有发展前途的植物性抗癌药。利用喜树的幼叶为外植体诱导出喜树愈伤组织，在SH培养基上（附加5mg/L的NAA及0．2mg/L的6－BA，30g/L的蔗糖）诱导出的愈伤组织有根的分化，用TLC法能鉴定其中含有喜树碱，用HPLC法确定其喜树碱的含量最高可达到0．00245％，为原植株的1／20。在Hela细胞的抗癌实验中，喜树愈伤组织乙醇提取物表现出较强的抗癌活性。