环孢菌素A产生菌的分子鉴定及其原生质体制备

环孢菌素A高产菌株No.421502经形态学特征和分子标记鉴定,确认为镰孢菌属,命名为Fusariumsp.No.421502.收集Fusarium sp.No.421502孢子刚萌发的幼嫩菌丝体,以0.7 mol/L KCl为渗透压稳定剂,用质量浓度为20 mg/mL的蜗牛酶,30℃80 r/min处理5 h制备原生质体.原生质体为7×105/mL,原生质体形成率为62.8%.制备的原生质体稀释后接入再生培养基,再生率为29.6%.     

破囊壶菌△^4-脂肪酸脱饱和酶基因5’端侧翼区域的克隆与鉴定

应用衔接头PCR（LA-PCR）技术,扩增得到约1000bp的海洋破囊壶菌△^4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物。对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列（Genkbank登录号EU074209）具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件。将扩增得到的脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的质粒pGlow-TOPO中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞。荧光显微观察大肠杆菌阳性转化予发出荧光,侧翼序列合有启动子功能得到确认。     

伯克霍尔德菌ZYB002胞外脂肪酶的分离纯化及其酶学性质分析

伯克霍尔德菌ZYB002胞外脂肪酶发酵上清液经冻干、透析、DEAE Sepharose Fast Flow层析柱和Sephadex G-75层析柱等步骤纯化后,获得电泳纯的脂肪酶.纯化后的脂肪酶分子质量为33 ku,水解棕榈酸对硝基苯的比活力为1 902.5 U·mg-1.脂肪酶催化水解反应的最适温度和最适pH值分别为50℃和8.5;在30~65℃和pH 3.0~10.0的范围内保持相对稳定.脂肪酶对烷烃、非离子型表面活性剂等有机溶剂具有较好的耐受性.在最适条件下,脂肪酶水解pNPP的Km和Vmax分别为3.79 mmol·L-1和714.29μmol·mg-1·min-1.     

破囊壶菌Δ4-脂肪酸脱饱和酶基因5'端侧翼区域的克隆与鉴定

应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000 bp的海洋破囊壶菌Δ4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物.对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件.将扩增得到的脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒pGlow-TOPO中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞.荧光显微观察大肠杆菌阳性转化子发出荧光,侧翼序列含有启动子功能得到确认.