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目的:构建表达猪卵透明带蛋白(pZP3α)的重组乳酸杆菌.方法:用PCR方法扩增得到短小乳酸杆菌染色体中的S-层蛋白的信号肽序列和猪卵透明带的pZP3α基因,并依次克隆到乳酸杆菌整合型表达质粒pllac的lac启动子下游,得到质粒pllac-pZP3α.将质粒pllac-pZP3α电穿孔转化干酪乳酸杆菌(L.casei CECT5276),挑选转化后的耐药菌落,在含5 μg/mL红霉素的MRS培养基中培养,抽提其基因组DNA做模板,PCR鉴定验证pZP3α基因是否整合到乳酸杆菌的基因组中.筛选重组菌在无红霉素选择压力下传代培养直至发生第2次重组使红霉素抗性基因消失.结果:酶切与测序结果表明信号肽和pZP3α基因正确克隆到载体pllac中;PCR鉴定证实pZP3α基因成功重组到乳酸杆菌的基因组中,培养50 d后重组乳酸杆菌抗性消失,用斑点免疫印迹化学发光法检测到经终质量分数为0.75%乳糖诱导后的上清中有pZP3α蛋白分泌.结论:成功构建表达pZP3α的重组乳酸杆菌,pZP3α在乳酸杆菌中得到了稳定的、分泌表达. 相似文献
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苹果公司是美国计算机工业的巨子,曾被视为后工业时期美国高科技界的偶像而倍受人们青睐。然而近年来,该公司却在竞争中屡屡败北,去年一个季度的亏损额就达6900万美元,更为严重的是,曾一度使该公司独出群芳的一枝“花”——麦金托什计算机技术也开始凋 相似文献
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