结核分枝杆菌FabG4的生物信息学分析及功能初探

目的预测结核分枝杆菌(H37Rv)的FabG4蛋白的结构、与其相互作用蛋白及T、B细胞抗原表位。方法从NCBI数据库获取FabG4基因序列和氨基酸序列,通过在线软件对FabG4的理化性质、二级和三级结构、T、B细胞抗原表位及其相互作用的蛋白进行预测分析。结果 H37Rv FabG4基因全长1365bp,编码454个氨基酸,预测到该蛋白性质稳定,无跨膜区,属于非分泌蛋白,二级结构显示α-螺旋(Th)、β-折叠(Ee)、β-转角(Tt)、无规则卷曲结构(Cc)分别为43. 61%,14. 98%,9. 03%,32. 38%;有多个T、B细胞抗原表位及多个与FabG4蛋白相互作用蛋白。mc2155 FabG4过表达株生长曲线显示,过表达菌株较野生型的生存能力明显增强,差异有统计学意义(P0. 01),形态粗、长。结论结核分枝杆菌FabG4蛋白稳定,所含保守结构域与其功能密切相关,筛选出6个B细胞优势表位,CTL和Th细胞优势表位各8个,为研究FabG4蛋白的结构、功能和开发靶向新药、抗结核疫苗提供理论依据。     

MSMEG0372基因敲除、回补及过表达耻垢分枝杆菌的构建与鉴定

目的 为研究MSMEG＿0372基因的功能,构建该基因敲除、回补及过表达耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.smegmatis)并鉴定。方法 聚合酶链反应(PCR)扩增MSMEG＿0372基因的左、右臂(即等位基因互换底物,allele exchange substrates, AES)。AES与p0004s经过酶切并连接,构建p0004s-AES质粒。p0004s-AES与phAE159经过酶切并连接,构建phAE159-AES噬菌粒。噬菌粒转化至M.smegmatis,30℃培养,扩增重组噬菌体。用重组噬菌体侵染M.smegmatis,37℃培养,发生基因同源重组,形成MSMEG＿0372基因敲除菌株。筛选阳性菌落,PCR鉴定。PCR扩增MSMEG＿0372基因,构建pMV361-MSMEG＿0372质粒。将pMV361-MSMEG＿0372质粒分别导入MSMEG＿0372基因敲除菌株和野生型M.smegmatis,构建MSMEG＿0372基因回补菌株和MSMEG＿0372基因过表达菌株。筛选阳性菌落,PCR鉴定。结果 PCR扩增出MSMEG＿0372...     

MSMEG3150调控耻垢分枝杆菌细胞壁的结构与生物膜的形成

目的 探讨耻垢分枝杆菌中MSMEG＿3150蛋白的功能。方法 构建耻垢分枝杆菌MSMEG＿3150过表达株;采用CRISPRi技术构建耻垢分枝杆菌MSMEG＿3150沉默株。使用MSMEG＿3150过表达株、沉默株和野生型菌株进行实验研究。测定细菌生长曲线;刚果红实验检测细菌表面疏水性。透射电镜、扫描电镜等观察菌体形态、结构。LC-MS测定脂肪酸含量。结晶紫染色定量生物膜形成。结果 过表达MSMEG＿3150导致菌体变长、细胞壁增厚,生长速度加快,脂质含量增多,增强细菌表面的疏水性,促进生物膜形成。结论 MSMEG＿3150可能通过调控耻垢分枝杆菌细胞壁的脂质含量和表面疏水性从而影响细菌的生长特性及生物膜的形成。