巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法学建立

目的 建立巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法.方法 通过RT-PCR、TA克隆等技术制 备CYP3A29-pMD18-T和β-actin-pMD18-T实时荧光定量标准品,并以CYP3A29-pMD18-T标准品为模板,对不同浓度Mg2与探针组合的TaqMan反应体系进行筛选,TaqMan PCR方法,并对其有效性及重复性进行评价.结果 筛选到的TaqMan PcR方法为:PCR总体积10 μL,其中含1xBuffer、5.5 mmol/L Mg2、0.8 mmol/L dNTPmix、0.3 μmol/L上下游引物、0.2 U/μL rTaq、0.I μmol/L探针、1 μL模板.热循环条件为94℃5 min→40cycles(94℃15 s→60℃ 45 s→读板).结论 建立了有效测定巴马香猪CYP3A29 mRNA拷贝数浓度的TaqMan PCR方法.通过该方法分别定量CYP3A29和β-actin mRNA的拷贝数浓度,即可求出CYP3A29mRNA的表达水平.     

巴马香猪CYP3A29mRNA组织分布的TaqManRT—PCR分析

为探讨巴马香猪CYP3A29 mRNA的组织分布特征,全面比较其与人CYP3A4 mRNA组织分布规律,利用TaqMan RT-PCR技术对巴马香猪主要组织CYP3A29 mRNA进行定量.结果表明,巴马香猪CYP3A29 mRNA的组织分布特征与报道的人CYP3A4相似,且均以肝脏最高,从转录水平提示巴马香猪及其肝脏均可以用作人CYP3A4的药物代谢研究模型.     

巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法学建立

目的建立巴马香猪CYP3A29m RNA表达的TaqMan定量方法。方法通过RT—PCR、TA克隆等技术制备CYP3A29-pMDl8-T和β-actin—pMDl8-T实时荧光定量标准品,并以CYP3A29-pMDl8-T标准品为模板,对不同浓度Mg^2＋与探针组合的TaqMan反应体系进行筛选,TaqMan PCR方法,并对其有效性及重复性进行评价。结果筛选到的TaqMan PCR方法为：PCR总体积10μL,其中含l×Buffer、5．5mmol／L Mg^2＋、0．8mmol／L dNTPmix、0．3μmol／L上下游引物、0．2U/μL rTaq、0．1 μnoL／L探针、1μL模板,热循环条件为94℃ 5 min→40cycles（94℃15s→60℃45s→读板）。结论建立了有效测定巴马香猪CYP3A29 mRNA拷贝数浓度的TaqMan PCR方法,通过该方法分别定量CYP3A29和β-actln mRNA的拷贝数浓度,即可求出CYP3A29 mRNA的表达水平。     

巴马香猪CYP2D25 mRNA水平的TaqMan分析

为探索巴马香猪CYP2D25 mRNA的组织分布特征及其水平与人CYP2D6的相似性,本研究应用TaqMan法对巴马香猪主要组织CYP2D25 mRNA进行了定量.结果表明,该酶主要分布于肝脏,与报道的人CYP2D6相似,但其水平却高于人CYP2D6,从转录水平提示巴马香猪用于人CYP2D6介导的药物代谢动物模型研究存在一定的局限性.