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1.
CDC16Hs是细胞周期末期促进复合物(APC)的亚基.利用基于LexA的酵母双杂交系统,把它作为诱饵蛋白筛选人胎脑文库,发现它与DNA双链断端修复蛋白Ku80的羧基端相互作用.CDC16Hs和全长Ku80的结合通过pull down实验在体外得到验证. 相似文献
2.
人血管生成素样蛋白4在毕赤氏酵母中的表达及其生物活性的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
将编码人的血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)的cDNA克隆至分泌表达载体pPIC9k上,在Pichia Pastoris酵母宿主菌SMD1168中获得分泌表达;用MTT方法检测的细胞生长抑制实验结果表明,发酵液中分泌表达的重组蛋白ANGPTL4对人脐静脉内皮细胞的生长具有一定的抑制作用. 相似文献
3.
甜蛋白Monellin在巴斯德毕赤氏酵母中的胞内表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将PCR扩增得到的Monellin基因片段插入Pichia pastoris胞内表达质粒Ppic3.5k‘,然后转入Pichia pastoris SMD 1168受体菌中,用G418筛选高拷贝菌株,并进一步对其进行PCR鉴定,获得的阳性克隆菌株经甲醇诱导60h,SDS-PAGE结果显示菌株破壁液中含有表达的Monellin,其大小约为11ku,并具有甜度。 相似文献
4.
借助化学合成的寡聚核苷酸接头将酵母PGK1启动子和α因子前导序列相连构建成一个αB干扰素基因的分泌表达载体YFD65.含质粒YFD65的酵母菌BJ1991能分泌表达αB干扰素,分泌到培养基中的αB干扰素的量为10~8U/L. 相似文献
5.
α2b干扰素基因与Ag85B基因在毕赤氏酵母中的融合表达 总被引:1,自引:0,他引:1
Ag85是结核分枝杆菌的一种分枝菌酸转移酶复合体,在结核分枝杆菌的细胞壁合成过程中起着重要作用Ag85B是该复合体的一个组分,具有较好的免疫原性通过连接多肽(G4S)4的编码序列,将α2b干扰素基因与Ag85B基因连成融合基因,然后克隆到毕赤氏酵母表达载体pPIC9上,转化Pichia pastoris SMD1168后获得重组酵母工程菌SMD1168/pPIC9-α2bAg85B,经甲醇诱导培养,发酵上清液经抗病毒活性测定,Western blot鉴定以及初步纯化,结果表明,分泌表达的融合蛋白具有一定的抗病毒活性. 相似文献
6.
将乙肝病毒表面抗原S-preS1融合基因SA-28插入质粒载体pAO815的EcoR Ⅰ位点中,将其置于Pichia Pastoris酵母AOX1启动子控制下.利用电转化技术,融合基因表达单元连同HIS4基因被整合到受体菌SMD1168基因组中.对得到的工程菌进行发酵和表达产物的研究表明:SA-28基因在该系统中的表达受甲醇诱导调控;SA-28融合基因的表达产物具有S和PreS1的双重抗原性.用CsC1密度梯度离心法纯化了表达产物,融合抗原活性峰位于密度为1.19 mg/cm3的区带. 相似文献
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hASB-8基因是对肿瘤细胞生长具有明显抑制作用的人类新基因.其编码蛋白属于人ASB蛋白家族中的一个成员,与小鼠中的ASB-8蛋白同源性达96%.保守结构域分析显示hASB-8在N端包含4个Ankyrin repeats,在C端包含了一个SOCS box.利用酵母双杂交技术,筛选了人的胎盘(Placenta)cDNA文库,获得了与KASB-8相互作用的2个蛋白,Elongin C和CDK4 binding protein;并在二倍体酵母体内进行了验证.这些试验提示hASB-8蛋白可能介导肿瘤细胞中靶蛋白和泛素复合体之间的相互作用,并与肿瘤细胞靶蛋白转录调节有关. 相似文献
8.
人类超氧化物歧化酶在酿酒酵母系统中的高效表达 总被引:3,自引:0,他引:3
超氧化物歧化酶(SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用.对一从人类胎肝cDNA文库中筛到的SOD基因片段进行重组、克隆,并得到带有启动子PADHZ—GAPDH和终止子TADHI的高效稳定的酿酒酵母表达载体pHC11-hSOD.转化酿酒酵母DCO4后获得工程菌DCO4/pHC11-hSOD.表达产物经破壁后SDS-PAGE电泳检测为20ku的条带;酶活性测定结果表明发酵液有40万U/L的hSOD活性.此外,还研究了工程菌的发酵条件和hSOD产物的纯化方法.纯化产物在SDS-PAGE上和Superdex分子筛检测显示,所得产物的纯度已达95%以上. 相似文献
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在杂合启动子控制下乙肝病毒表面抗原SA-28融合基因在酵母中的表达及调控 总被引:1,自引:1,他引:0
采用酵母杂合启动子PADH2-CUP1或PADH2-GAPDH及终止子TADH1,构建了一系列酵母表达载体.在这些表达载体中插入乙肝病毒表面抗原S-preS1融合基因SA-28后,将合乙肝病毒表面抗原的表达单元克隆至高稳定质粒PHC11的BamHI位点.然后将表达质粒分别转化酿酒酵母Y16,Y19.对SA-28基因表达的研究表明,在酵母菌胞内实现了SA-28基因的高表达,且表达受葡萄糖浓度调控. 相似文献
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