一个新的用于植物转化的双元质粒载体的构建及应用

构建了一个适合农杆菌介导转化的双元T-DNA载体.载体pCNPT-Ⅱ含有与LacZ相连的多克隆位点,其分子量比常用的pBin19载体小了2.6kb.多克隆位点靠近T-DNA的右边界,植物选择标记基因新霉素磷酸转移酶基因靠近T-DNA的左边界,当T-DNA从右边界向左边界依次转移时,使外源基因应先于选择标记基因整合进植物基因组,可以避免产生无外源目的基因的转化植株.以β-葡糖醛酸酶基因作报道基因构建了植物表达载体pCNPT-ⅡGUSA,经农杆菌介导转化了烟草.分子检测表明,在外源目的基因与选择标记基因共整合的频率上,pCNPT-Ⅱ构建的植物表达载体强于pBin19来源的pBI121.     

DNA甲基化对转基因表达的影响

DNA甲基化在调节真核生物基因表达过程中起着十分重要的作用。在植物转基因研究中,外源DNA甲基化往往易导致外源目的基因失活。利用农杆菌介导将β-葡糖醛酸酶基因（uidA)导入烟草,发现外源uidA基因在部分转基因植株中发生了基因失活现象。Northern杂交实验证实,基因失活的植株内检测不到外源uidA基因的转录产物,同时伴随着基因上游启动子区域的DNA甲基化现象。上述实验结果提示,转基因失活很可能是由于启动子区域甲基化引起的。     

玉米MAR序列的分离及其在转基因烟草中的功能研究

从玉米基因组中分离了一段核基质结合区(MAR)序列,它位于乙醇脱氢酶1基因的5'端启动子区域.为研究此段MAR序列在转基因植物中的功能,将MAR构建在报告基因β-葡糖醛酸酶(GUS)基因(uidA)和植物选择标记新霉素磷酸转移酶II基因(nptII)的两侧形成植物表达载体,在载体中两段MAR之间的距离为6.2kb.GUS活性检测表明,MAR序列对报告基因的表达水平没有影响.这一现象与MAR只构建在报告基因两侧形成小环时提高外源基因表达的结果不同,为进一步研究MAR作用机制提供了基础.