大鼠胰岛β细胞原代培养的一种实用方法

以Ｖ型胶原酶分离胰腺得到胰岛，在ＥＧＴＡ预处孵育后以低浓度的胰蛋白酶和ＤＮａｓｅⅠ酶联用消化胰岛建立了大鼠胰腺β细胞的分离及原代培养方法。     

工序质量控制在变电站施工过程中的应用

工程项目的施工过程,是由一系列相互关联、相互制约的工序所构成,工序质量是基础,直接影响工程项目的整体质量。要控制工程项目施工过程的质量,首先必须控制工序的质量。     

咖啡因对大鼠肾上腺嗜铬细胞钙信号调节作用

在单个大鼠肾上腺嗜铬细胞上,采用钙显微荧光测量方法,测量了咖啡因对胞内游离钙浓度的影响。实验结果表明,在２Ｃａ６２＋外液中,咖啡因（１ｍｍｏｌ／Ｌ,１０ｍｍｏｌ／Ｌ,４０ｍｍｏｌ／Ｌ）对细胞的自发振荡表现出明显的抑制作用;对不表现自发振荡的细胞,咖啡因能引起钙浓度的升高或钙振荡,在无外钙条件下研究连续咖啡因刺激引起的钙浓度变化,发现胞内钙加易排空,但随后的含钙咖啡因刺激仍可引起钙升高。     

大鼠胰腺β细胞内的钙库诱发钙信号

以单个大鼠胰腺β细胞为实验对象,用显微荧光法测量不同刺激下的钙信号,有外Ｃａ＾２＋条件下,分别以葡萄糖、ＫＣｌ和甲苯磺丁脲（ｔｏｌｂｕｔａｍｉｄｅ）刺激细胞,均能导致细胞内自由Ｃａ＾２＋浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）升高,无外钙条件下,５ｍｍｏｌ／Ｌ咖啡因（ｃａｆｆｅｉｎｅ）或乙酰甲胆碱（ＭＣｈ）亦能独立地导致［Ｃａ＾２＋］ｉ升高,说明β细胞内存在ＩＰ３型和ｒｙａｎｏｄｉｎｅ型两类钙库,咖啡因和乙酰甲胆     

咖啡因对大鼠肾上腺嗜铬细胞钙信号调节作用

在单个大鼠肾上腺嗜铬细胞上，采用钙显微荧光测量方法，测量了咖啡因对胞内游离钙浓度的影响．实验结果表明，在２Ｃａ２＋外液中，咖啡因（１ｍｍｏｌ／Ｌ，１０ｍｍｏｌ／Ｌ，４０ｍｍｏｌ／Ｌ）对细胞的自发振荡表现出明显的抑制作用；对不表现自发振荡的细胞，咖啡因能引起钙浓度的升高或钙振荡．在无外钙条件下研究连续咖啡因刺激引起的钙浓度变化，发现胞内钙库易排空，但随后的含钙咖啡因刺激仍可引起钙升高．同时，在无外钙条件下施加咖啡因可检测到激素的分泌，表明由咖啡因导致的钙库释放可以独立地触发分泌     

大鼠胰岛β细胞原代培养的一种实用方法

以Ｖ型胶原酶分离胰腺得到胰岛，在ＥＧＴＡ预孵育后以低浓度的胰蛋白酶和ＤＮａｓｅＩ酶联用消化胰岛，建立了大鼠胰腺β细胞的分离及原代培养方法．反复实验表明（ｎ＝１０），所获得的细胞表面光洁、完整、呈球形，功能正常，能对生理剌激物迅速反应，适用于通常的单个细胞的电生理学实验．     

大鼠胰腺β细胞内葡萄糖钙信号调控机制

用fura-2显微荧光法测量细胞内自由钙浓度[Ca2+]i,在单个大鼠胰腺β细胞上探讨了葡萄糖诱发的[Ca2+]i初期下降相(GIDP)、钙振荡和钙库释放的影响因素.实验中发现,非刺激浓度的葡萄糖(5 mmol/L)仍可导致β细胞特有的GIDP.GIDP与去极化无关,也不受外钙的影响,但能被内质网钙泵抑制剂thapsigargin抑制,提示此过程可能缘于钙库对胞浆Ca2+的摄取.在胞内钙振荡过程中移去胞外液中的Ca2+,振荡会逐渐停止;若施加thapsigargin,钙振荡仍能继续维持,说明钙振荡主要缘于外钙内流,钙库在钙振荡维持中的作用不大.无外钙条件下,葡萄糖诱导的钙库释放能被钠通道阻断剂TTX所抑制,而高钾对钙库的释放作用却不受TTX的影响,这提示膜去极化可以直接诱导钙库释放.因此,细胞膜去极化、外钙内流、胞内钙库的摄取和释放共同协调着β细胞内的Ca2+平衡.