基于GC-MS研究不同产地三色藜麦种子的代谢物差异

为了研究不同生境对藜麦发育的影响,以不同产地的藜麦种子为研究对象,筛选显著差异代谢物质和相关代谢通路,利用GC-MS平台进行非靶向代谢组学分析,分析了青海都兰县和四川盐源县两地产出的黑藜、红藜、白藜种子的代谢轮廓,将原始数据经XCMS online平台预处理后进行后续多元统计分析。结果表明,青海都兰县和四川盐源县两地的黑、红、白藜麦种子的代谢特征均不相同,其中红藜麦种子与白藜麦种子差异较大,而黑藜麦种子差异最小;红藜存在显著差异,共有特征峰570个,上调物少于下调物;黑藜差异最小,上、下调趋势与红藜一致;白藜差异较大,上、下调趋势与红藜和黑藜相反,共有特征峰486个,上调物质多于下调物质;不同生境对藜麦的影响较大,黑藜和红藜更适宜在青海都兰县种植,而白藜更适宜在四川盐源县种植。研究结果可以指导青海都兰县和四川盐源县两地藜麦的栽培育种,也为深入研究藜麦的抗逆性机理提供了理论依据。     

烟草反义Mlo基因表达载体的构建

获得烟草反义Mlo基因的植物表达载体pBI 121-Mlo,为进行烟草遗传转化,获得该基因表达的缺陷型植株打下基础.从烟草叶片中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到Mlo基因的c DNA,以此为模板设计反义引物,通过PCR扩增出反义Mlo基因,将此反义Mlo基因与T载体连接,测序正确后再将此反义片段与植物表达载体pBI 121连接,构建烟草反义Mlo基因的植物表达载体pBI 121-Mlo.经Kan选择筛选出反义重组菌落,碱裂解法小量提取质粒后,用Xba I和Bam HI双酶切后再进行电泳鉴定.结果表明,目的基因已与植物表达载体pBI 121连接成功.成功构建了烟草反义Mlo基因表达载体pBI 121-Mlo.     

三角豆蛋白的提取及Osboren分类

以成熟干燥的三角豆为原料,采用酸沉碱提的方法进行蛋白质提取,再将提取后的蛋白分成透析蛋白和未透析蛋白两组,进行Osboren分类法分级提取清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,并测定分类蛋白的含量.按照Osboren分类法分级提取未透析的三角豆蛋白所得的清蛋白含量229.9 mg,球蛋白含量343.3 mg,醇溶蛋白含量66.6 mg,谷蛋白含量341.8 mg,所占比例依次为23.4%、35%、6.8%、34.8%,透析后的三角豆蛋白提取到的清蛋白含量144.2 mg,球蛋白含量341.8 mg,醇溶蛋白含量70.7 mg,谷蛋白含量328.9 mg,所占比例依次为16.3%、38.6%、8%、37.1%.     

PEG 4000/(NH_4)_2SO_4双水相体系萃取欧李种仁蛋白研究

利用聚乙二醇(PEG)4000/(NH_4)_2SO_4双水相体系萃取欧李种仁蛋白.研究了PEG 4000/(NH_4)_2SO_4双水相体系的体系组成对蛋白分配系数及回收率的影响,最后确定了最佳的双水相萃取体系.在18%的(NH_4)_2SO_4与10%的聚乙二醇构成的双水相体系中,蛋白的分配系数最小为0.495,回收率为92.0%.对体系的最大萃取容量测定结果表明,双水相体系易于放大和进行连续性操作,适用于大规模生产活性蛋白.     

响应面法优化藜麦非靶向代谢组样品的衍生化条件

为优化藜麦非靶向代谢组样品的衍生化条件,获得更多的代谢物信息.以N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺(MSTFA)为衍生化试剂,在单因素实验的基础上,用响应面法优化衍生化试剂的体积、衍生化温度、衍生化时间,并用GC-MS法检测衍生化后的代谢物质,通过出峰个数和总峰面积表征衍生化的效果.结果表明,响应面法优化后的最佳衍生化条件为衍生化试剂的体积为100μL,衍生化温度为40℃,衍生化时间为27 min.在最佳条件下得到的代谢物总峰个数和峰面积分别为69个和2.34×10~(10),与模型预测值(70个,2.38×10~(10))相近.该方法操作简单,衍生化效果好,结果具有重复性与可操作性,可用于藜麦非靶向代谢组样品的衍生化处理.     

二元双水相体系对欧李种仁清蛋白及球蛋白的萃取

为研究二元双水相体系对欧李种仁清蛋白和球蛋白的萃取条件,采用(乙醇+丙酮)(二者体积比为1∶2)/硫酸铵构成的二元双水相体系,对欧李种仁的清蛋白和球蛋白分别进行萃取,通过比较2种蛋白在此二元双水相体系中的分配系数、回收率等特性,最终确定欧李种仁清蛋白和球蛋白的最佳萃取条件。实验结果表明:当二元双水相体系组成为27.5%(乙醇+丙酮)(二者体积比为1∶2)和26%硫酸铵时,清蛋白的分配系数最小,萃取率达到最大;当二元体系组成为17.5%(乙醇+丙酮)(二者体积比为1∶2)和24%硫酸铵时,球蛋白的分配系数最小,萃取率达到最大。二元双水相体系为分离清蛋白与球蛋白提供了新的途径,在植物来源的清蛋白与球蛋白提取中具有良好的应用前景。     

基于PEG和不同盐的双水相体系萃取牛血清白蛋白研究

建立了PEG 4000/NaH_2PO_4和PEG4000/(NH_4)_2SO_4两种双水相体系,比较了两种双水相体系对牛血清白蛋白萃取行为的影响.考察了无机盐种类和浓度、PEG质量分数、牛血清白蛋白浓度等因素对双水相形成以及对牛血清白蛋白分配行为的影响.结果表明PEG 4000/NaH_2PO_4双水相系统的最佳萃取条件为:PEG4000=11.50%,NaH_2PO_4=20%,此时K值最小为0.45,达最大回收率.PEG4000/(NH_4)_2SO_4双水相系统最佳萃取条件为:PEG4000=12%,(NH4)_2SO_4=17.50%,此时K值最小为0.42,达最大回收率.