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从秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的基因突变库中筛选出目的基因的突变种系,并对其进行分子机制的研究,是研究不同基因及其蛋白产物作用机制的一项基本技术.以sec-10突变种系的成功筛选为例,详细描述如何通过PCR检测方法从笔者实验室所构建的国内第一个秀丽线虫基因敲除突变库(可进行多达几百次的筛选量)中筛选出目的基因的突变种系,同时证明突变库的可用性.根据sec-10基因序列设计多套针对不同靶点的含干扰引物的巢式引物,通过凝胶电泳正确判断扩增产物的特异性和干扰引物对长片段产物的抑制特性,以选择有效的检测引物.简化了线虫复苏后的饲养方法,以取代恒温恒湿培养箱的使用.通过纯和致死平衡子的引入,克服了sec-10基因突变致死所导致的无法稳定传代的问题.总结了从秀丽线虫基因突变库中筛选突变种系的注意要点,为国内其它线虫基因突变库的筛选提供重要的参考意见. 相似文献
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Sec-10基因敲除导致的线虫产卵障碍的研究 总被引：1，自引：1，他引：0
Exocyst复合物是由SEC-3、SEC-5、SEC-6、SEC-8、SEC-10、SEC-15、EXO-70和EXO-84共8种蛋白亚基组成的重要囊泡栓系因子。尽管已经被广泛地研究,但是对于该复合物的认识仍然有限。通过基因敲除的方法,获得了Sec-10基因突变的线虫,并发现该线虫存在产卵障碍的表型。在对性腺形态、精子功能、卵黄吸收、AC细胞的融合以及神经对产卵区域肌肉控制等产卵途径中若干关键因素的进一步研究中,发现Sec-10基因突变的线虫与野生型相比不存在明显区别。因此需要进一步的研究来阐明该表型产生的原因。 相似文献
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AIY神经元作为线虫重要的中间神经元，一般认为在线虫的温度感受中发挥功能．分别进行的苯甲醛和硫酸铜的趋向性实验显示，AIY在线虫对于这两种化学物质的感受过程中起作用，而且对于硫酸铜的感受行使抑制功能．苯甲醛和硫酸铜的抉择实验显示，AIY在线虫中能够对这两种物质引起的信号进行整合，在ttv-3突变体中AIY神经元仍然可以行使整合的功能．但是无法判断该整合的功能是否完全无缺陷． 相似文献
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