两种遗传标记筛选物在马铃薯Desiree遗传转化应用中的研究

以马铃薯茎段为外植体,采用农杆菌介导法,将带有Bar和hpt基因的植物表达质粒载体转入马铃薯栽培品种Desiree,并对遗传转化过程中的预培养时间、抑菌素浓度、筛选物抗除草剂Basta和潮霉素的浓度等因素进行了研究.结果表明:预培养时间2 d转化效率最高;头孢霉素浓度为300 mg/L时,能够有效的抑制农杆菌的生长;以除草剂Basta为筛选物时,适宜的筛选压为0.6 mg/L,用潮霉素(Hyg)作为筛选物时,以15 mg/L为最合适;获得的转基因植株经PCR分析,证实Bar基因己经整合到马铃薯基因组DNA中,从而建立了以除草剂Basta或以潮霉素为遗传标记筛选物的马铃薯栽培品种Desiree的遗传转化体系,为利用基因工程进一步改良马铃薯品质奠定了基础.     

培养及接种方式对丽格海棠组培快繁的影响

以丽格海棠叶片为外植体,研究不同接种模式和培养方式对丽格海棠组培快繁的影响.结果表明:丽格海棠叶片诱导分化培养时,叶片反放的接种模式优于叶片正放;丽格海棠丛生芽增殖培养时,液体培养,尤其是丛生芽前期增殖时采用液体旋转培养效果优于固体培养.此结果对丽格海棠组培快繁具有一定的指导意义.     

高盐胁迫渗透对SBD2重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的影响

在基因工程的操作中, 包涵体的形成是人们利用大肠杆菌表达外源蛋白质的一大难点. 本研究将环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)环状糊精糖基转移酶 (CGTase) 的淀粉粒结合域 (SBD) 基因编码序列的两个拷贝通过一连接肽连接 (SBD2) 后, 克隆到大肠杆菌表达载体pTrcHis B上, 得到的pTrcHis B/SBD2质粒转化大肠杆菌Top10, 研究了不同培养基、不同诱导温度和时间对SBD2蛋白表达的影响. 结果表明, 利用相容性溶质山梨醇和甜菜碱等, 在高盐胁迫下, 实现了SBD2重组蛋白质在大肠杆菌中的可溶性表达, 这一结果为在体外研究SBD2蛋白的功能奠定了基础.     

不同消毒剂对油菜种子消毒效果的比较

以油菜种子为实验材料,研究了不同消毒剂及其不同消毒时间对油菜种子的消毒效果,寻找一套适合油菜种子的消毒方法.结果表明:0.1%HgCl2 5min、10%NaClO 15 min、10%NClO 10 min+吐温-80和5%Ca(ClO)2 10 min+吐温-80消毒效果较好,在油菜种子实际消毒时可考虑选用.     

SBD在重组蛋白质中位移对其酶活性及与淀粉粒结合性能的影响

将环状糊精糖基转移酶的SBD基因编码序列连接到萤光素酶基因的5′-端(SBD-LUC)后,重组基因通过农杆菌介导导人马铃薯植株中．对重组蛋白在转基因淀粉粒中的定位与积累、重组蛋白中SBD与淀粉的亲和性以及萤光素酶的活性进行了分析比较．结果表明：重组蛋白在马铃薯淀粉粒中获得了特异性表达,当C-端SBD移位到重组萤光素酶蛋白的N-端后,SBD和淀粉的亲和性与LUC-SBD重组蛋白质比较有所下降,但萤光素酶活性则与马铃薯遗传背景有关。     

指示与回指的语用区别

本文从语用的角度就指示和回指进行了对比，对这两个概念的区分提出了建设性的标准。指示的基本特征包括文外照应、自我中心以及带有话语者意图；而回指的基本特征是文内照应、没有语境中心和话语者意图。本文从语用的角度将是否舍有隐含意义作为区分指示和回指的一个标准。     

禽流感病毒H5HA基因在马铃薯中的表达

将编码禽流感病毒H5N1亚型HA基因(H5HA)的cDNA片段与CaMV35S启动子融合,通过农杆菌介导法转化马铃薯.分别用PCR,RT-PCR和Western斑点杂交方法对重组H5HA基因在马铃薯植株中的表达情况进行分析.实验结果表明,获得的12株转基因植株中,11株为阳性.Western斑点杂交检测表明H5HA重组蛋白已在马铃薯体内表达.这一结果将为利用马铃薯作为生物反应器生产禽流感口服疫苗提供理论依据.     

利用GBSSI和SBD作为“锚”将荧光素酶定位到淀粉粒中效果的比较

利用马铃薯淀粉粒结合型淀粉合成酶 I （GBSSI） 作为“锚”，在马铃薯淀粉粒形成时将荧光素酶 （LUC）定位到淀粉粒中. 并对GBSSI/LUC重组蛋白质在转基因淀粉粒中的定位与积累、重组蛋白质中GBSSI与淀粉粒的亲和性以及荧光素酶的活性等进行了分析. 结果表明，GBSSI/LUC重组蛋白质在马铃薯淀粉粒中获得了特异性表达，但与以微生物的淀粉粒结合结构域 （SBD） 作为“锚”的SBD/LUC重组蛋白质相比较， 它与淀粉粒的亲和性以及荧光素酶的活性均下降. 由此认为，在淀粉粒形成过程中，利用SBD作为 “锚”将荧光素酶蛋白质定位到淀粉粒中的效果要优于GBSSI.