鸡传染性支气管炎HA抗原的制备及HI试验方法的建立

用１０％Ａ型魏氏梭菌滤液处理１００倍浓缩ＩＢＶ Ｍ４１株病毒液,成功地制备了ＩＢＶ ＨＡ抗原,效价为１：６４￣１：１０２４。用该抗原建立了ＩＢＶ ＨＩ试验方法。抗原在４℃保存,５个月效价不变;加入０．１％的甲醛及１／万的硫柳汞使抗原效价下降１￣２个滴度。对ＳＰＦ鸡血清、Ｍ４１阳性血清、其它鸡病标准阳性血清以及疫苗免疫试验鸡只血清的ＩＢＶ ＨＩ抗体监测结果证明,该方法操作简便、快速、敏感性高、特异性     

鸡补体因子C3d对禽流感病毒M2蛋白免疫应答反应的增强作用

M2蛋白是禽流感病毒中具有交叉保护性的结构蛋白，但其抗原性差，难以诱导高水平的免疫反应.分别将一个鸡补体因子C3d，2个C3d基因同禽流感sM2基因（缺失跨膜区的M2基因）以柔性肽链Linker串联连接，构建了4个重组质粒并在大肠杆菌中表达出4种带有谷胱苷肽硫转移酶（GST）的融合蛋白：GST-C3d-sM2，GST-C3d-L2-sM2，GST-C3d-L1-C3d-sM2，GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2.将纯化后的4个融合蛋白及对照GST-sM2蛋白免疫BALB/c鼠4次（每组10只），结果在三免后，4个融合蛋白免疫的BALB/c鼠体内抗sM2抗体滴度与对照组相比均差异显著（p<0.05），并且GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2组的抗体滴度最高.另外，分别构建重组质粒pcDNA-sM2和pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2，然后以这两种DNA疫苗与蛋白GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2和GST-sM2同时接种14日龄SPF鸡3次（每组15只）.结果表明，蛋白GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2 和对照组GST-sM2的抗sM2抗体滴度差异明显（p<0.01），而pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2平均sM2抗体滴度也明显高于对照组pcDNAsM2（p<0.05）.分别以脂多糖（LPS）和刀豆蛋白（ConA）作为致裂原对SPF鸡的外周血淋巴细胞进行淋巴细胞转化试验 （MTT法）.结果以LPS刺激的淋巴细胞的增殖程度在融合蛋白GST-C3d1-L1-C3d2-L2-sM2免疫组与对照组GST-sM2之间以及pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2免疫组与对照组pcDNA-sM2之间均差异极显著（p<0.01），而Con A刺激的淋巴细胞各组之间则无显著差异.所有这些结果证实，鸡补体因子C3d无论是在原核系统表达的融合蛋白，还是插入DNA疫苗中均可以增强禽流感病毒M2蛋白引起的免疫应答反应.