蜂毒素-SP94杂合基因原核表达载体的构建及蛋白纯化

用可以特异结合到肝癌细胞膜上的小肽SP94,与蜂毒素连接,构建重组表达载体pET32a-蜂毒素-SP94.转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达结果,产物经Ni-NTA Agrosc亲和层析柱纯化后进行Tricine-SDS-PAGE检测.重组蛋白在大肠杆菌中高效表达,约占细胞总蛋白...     

exendin-4表达载体构建及其在大肠杆菌中分泌表达

目的:研究新型抗糖尿病药物exendin-4的分子作用机制,为exendin-4的大规模生产奠定基础.方法:采用重叠PCR法扩增出exendin-4的完整序列,并将其克隆至表达载体pET22b上,得到重组质粒pET-Exn4.重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,超声破碎表达产物,Tricine-SDS-PAGE分析exendin-4表达.结果:PCR、酶切鉴定和测序结果证明成功构建了重组表达载体pET-Exn4,Tricine-SDS-PAGE结果表明ex-endin-4基因在大肠杆菌中获得了分泌表达.结论:成功构建了exendin-4的重组表达载体并在大肠杆菌中实现分泌表达.     

毛细管气相色谱法测定桔梗中六六六异构体的含量

运用毛细管气相色谱法测定了桔梗中甲体六六六(α-BHC)、乙体六六六(β-BHC)、丙体六六六(γ-BHC)、丁体六六六(δ-BHC) 4种异构体的残留量.样品以丙酮提取,在氯化钠存在下,以二氯甲烷进行液-液分配,提取液以浓硫酸净化,采用SE-30弹性石英毛细管柱分离样品,ECD检测六六六残留量.检出限为1.6×10-14～3.8×10-13 g/mL,回收率为85.24%～99.86%,峰面积相对标准偏差为0.61%～2.2%.