海产干货中克罗诺杆菌污染分布调查及生物学特性研究

克罗诺杆菌是一种革兰氏阴性菌,该菌主要寄生于人和动物的肠道,易引发新生儿脑膜炎、菌血症及坏死性小肠结肠炎等一系列高致死率疾病。通过改进的国家标准检测方法开展120种海产干制品中克罗诺杆菌的污染调查,并对分离菌株进行生物学特性研究。结果显示:克罗诺杆菌的检出率为17.83%,进一步研究23株分离菌株的菌膜形成能力与鞭毛运动能力,11号菌株的菌膜形成能力最强并且有较强的运动性。研究表明:海产干货制品中克罗诺杆菌污染具有较高的污染率,菌株表现出不同程度的生物膜形成能力和运动性,说明该菌污染干燥海产品干货可能与生物膜形成有关,为预防与控制海产干货制品中克罗诺杆菌的污染提供了基础数据。     

姜黄素对黄曲霉菌的生长抑制

文章研究姜黄素对黄曲霉的抗真菌效果。实验发现,0.3 mmol/L的姜黄素对黄曲霉孢子萌发率、芽管长度以及菌丝生长均有显著抑制作用,抑制率分别为11.4%、28.8%、21.4%。姜黄素显著抑制黄曲霉毒素产生量,姜黄素处理组比污染阳性对照组减少了46.9%。在马铃薯葡萄糖琼脂(potato dextrose agar, PDA)培养基中生长后发现黄曲霉孢子颜色由原来的黄绿色变成白色,说明姜黄素抑制了黄曲霉孢子色素的合成。此外,姜黄素显著降低黄曲霉菌丝穿透力,从而使得黄曲霉的致病性下降。在连续处理3代后,黄曲霉侵染花生的能力也明显降低,说明黄曲霉没有产生耐受性。该实验结果为防控食品和饲料中黄曲霉污染提供了理论依据和数据支持。     

丙二酸盐克罗诺杆菌PspA包涵体蛋白的表达、复性及纯化方法优化

为研究丙二酸盐克罗诺杆菌(Cronobacter malonaticus)中噬菌体休克蛋白A(phage shock protein A,PspA)的结构与功能，文章构建了PspA融合蛋白表达载体，但重组蛋白以包涵体形式大量表达；为获取较高浓度的可溶性蛋白进行后续探究，使用尿素裂解液使蛋白变性后，经多种方法复性GST-PspA包涵体蛋白，使其重新恢复生物学活性。研究结果表明，4℃低温条件下包涵体蛋白经尿素梯度稀释透析以控制复性速率，防止蛋白分子快速聚集，可以实现高效复性和纯化GST-PspA融合蛋白。为进一步探索Psp系统中各蛋白的功能及相互作用的研究提供一定的参考。     

丙二酸盐克罗诺杆菌pspA基因的干燥诱导及表达载体构建

噬菌体休克蛋白(phage shock protein, Psp)系统目前已被证明与包膜应激反应相关。为了探索干燥胁迫下丙二酸盐克罗诺杆菌(Cronobacter malonaticus)噬菌体休克蛋白A(PspA)的作用，文章通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术验证干燥胁迫可以诱导丙二酸盐克罗诺杆菌PspA编码基因pspA显著表达，提示Psp系统对克罗诺杆菌抗干燥胁迫具有一定的作用。该文成功克隆出丙二酸盐克罗诺杆菌pspA基因并构建pET28a-EGFP-PspA原核表达载体，诱导PspA的高效表达，可用于后续分析PspA在干燥胁迫下的功能及定位情况，以期对丙二酸盐克罗诺杆菌Psp系统的干燥胁迫机制展开进一步的研究和讨论。     

BcMid1蛋白原核表达及其与绿原酸的作用

Mid1蛋白是真菌钙通道蛋白，在维持细胞钙稳态方面发挥着重要作用。文章为探讨绿原酸对灰霉(Botrytis cinerea)生长的抑制与钙之间的关系，利用平板实验观察绿原酸存在条件下外源钙离子对灰霉生长的影响，并构建BcMid1原核表达载体，在大肠杆菌Rosetta菌株中诱导BcMid1蛋白表达，利用绿原酸的荧光特性探究BcMid1蛋白与绿原酸的体外结合情况。结果显示，钙离子可以降低绿原酸对灰霉的生长抑制。成功构建的pET-28a∶∶BcMid1重组载体可以在Rosetta菌株中表达BcMid1蛋白，SDS-PAGE和荧光定量检测发现绿原酸和BcMid1蛋白可以结合，结合常数为3.93×10⁴ mol/L。结果表明，绿原酸对灰霉的抑制与钙摄入相关，并且BcMid1蛋白是绿原酸的潜在作用靶点。该文为进一步研究绿原酸对灰霉的抑制机理奠定了基础。